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马铃薯花药培养及双单倍体植株的鉴定

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摘要

以马铃薯的34个基因型为试验材料，进行花药培养。分析了马铃薯基因型、激素种类对花药诱导培养和愈伤组织分化的影响；以讷16、克新13、VA、中薯5号、西北果、鲁引1号、克19为试验材料，研究花粉发育时期、不同预处理、蔗糖浓度对马铃薯花药愈伤组织诱导率的影响；以讷16、克新13、VA、内薯7号和鲁引1号为试验材料，研究培养基附加物硝酸银、活性炭、马铃薯提取液等因素对马铃薯花药愈伤组织诱导率及褐化率的影响；以讷16、克13和内薯7号的愈伤组织为试验材料，对4种培养基和3个基因型进行联合方差分析；对马铃薯花药培养获得的再生植株进行了细胞学观察，获得的双单倍体植株进行移栽和微型薯的播种，并进行杂交农艺性状鉴定。
　　 试验结果如下：
　　 1.马铃薯花蕾的大小和颜色基本可以作为判断小孢子发育时期的一个简便而可靠的指标，小孢子处于单核靠边期时，花蕾大小5.0～6.0mm左右，颜色为浅绿色。
　　 2.在相同的培养条件下，不同基因型进行花药培养，基因型表现的愈伤诱导率差异明显。其中讷16的愈伤组织的诱导率高是8.1％，呼H9601-29的愈伤组织诱导率为0.2％。
　　 3.植物激素的浓度和配比对花药培养起决定性的作用。本试验以MS为基本培养基，加入不同浓度的NAA、2，4-D、KT配比，结果显示：MS+NAA0.5mg/L+2，4-D0.5 mg/L+KT0.5mg/L适合愈伤组织的诱导。
　　 4.马铃薯花药培养的低温预处理、甘露醇预处理和热激处理均能明显地提高马铃薯愈伤组织的诱导率；甘露醇预处理还能明显降低褐化率。实验结果显示：马铃薯花药先在4℃条件下处理2d，再用甘露醇预处理2d。然后接种，接种后33℃高温处理，处理24h效果最佳。甘露醇浓度40g/L效果为宜。
　　 5.培养基中加入硝酸银、活性炭和马铃薯提取液能提高愈伤组织的诱导率；另外加入硝酸银、活性炭可以降低褐化率。20mg／L硝酸银、0.5g/L活性炭和50g/L的马铃薯提取液，效果最佳。
　　 6.蔗糖作为糖源时，浓度为6％时马铃薯愈伤组织的诱导率高。当蔗糖和麦芽糖作为糖源，浓度均为6％时，麦芽糖对愈伤组织的诱导率高于蔗糖。
　　 7.用讷16、克13和内薯7号的愈伤组织为试验材料，对4种培养基和3个基因型进行联合方差分析，并用新复极差法对培养基和基因型组内进行多重比较。结果显示：品种间>培养基间>品种x培养基，表明品种间的差异显著性高于培养基和品种x培养基，培养基间的差异显著性高于品种x培养基。培养基间和品种之间的差异性极显著。
　　 8.利用气孔保卫细胞叶绿体计数法可鉴定植株染色体倍性。本试验结果表明：讷16双单倍体气孔保卫细胞叶绿体数在10~20个范围内，四倍体在20~30个范围内，叶绿体数少于20个的为双单倍体，多于20个而少于30个的为四倍体。
　　 9.移栽的双单倍体植株和四倍体对照在生长势、叶色、薯型等性状上进行比较，试验结果显示差异明显，并对获得的双单倍体微型薯进行播种、杂交和收获。

著录项

  • 作者

    刘辉;

  • 作者单位

    东北农业大学;

  • 授予单位 东北农业大学;
  • 学科 作物遗传育种
  • 授予学位 硕士
  • 导师姓名 卢翠华;
  • 年度 2009
  • 页码
  • 总页数
  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 中文
  • 中图分类 S532.035.2;
  • 关键词

    马铃薯; 花药培养; 双单倍体植株; 农艺性状;

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