马铃薯Y病毒分子检测试剂盒的研制及株系普查

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1 引言

1.1国内外马铃薯产业现状

1.2马铃薯病毒病原

1.2.1马铃薯病毒病原概述

1.2.2病毒病原的传播途径

1.2.3病毒病原的寄主范围

1.2.4马铃薯病毒病症状的主要类型及其病原种类

1.3马铃薯主要病毒简介

1.3.1马铃薯X病毒

1.3.2马铃薯Y病毒

1.3.3马铃薯A病毒

1.3.4马铃薯卷叶病毒

1.3.5马铃薯S病毒

1.3.6马铃薯M病毒

1.4马铃薯病毒病的防治

1.4.1健康种薯的生产

1.4.2抗病毒品种的培育

1.5马铃薯病毒的检测技术

1.5.1生物学方法

1.5.2电子显微镜技术

1.5.3免疫学检测技术

1.5.4分子检测技术

1.6马铃薯病毒检测技术的发展趋势

1.7本研究的目的、内容及意义

1.7.1目的和意义

1.7.2主要研究内容

2材料与方法

2.1材料

2.1.1毒源

2.1.2引物

2.1.3试制及酶类

2.1.4主要仪器

2.2方法

2.2.1样品采集

2.2.2血清学检测技术

2.2.3电子显微镜观察

2.2.4指示植物法

2.2.5植物总RNA的提取

2.2.6常规RT-PCR办法

2.2.7一步RT-PCR方法

2.2.8双重RT-PCR技术

2.2.9条件优化

2.2.10试剂盒的组装

2.2.11试剂盒的验证

3结果与分析

3.1筛选田检毒源

3.1.1 NCM-ELISA检测

3.1.2 DAS-ELISA检测

3.2毒源的纯化和保存

3.3电子显微镜观察

3.4分子生物学检测体系的建立

3.4.1总RNA的提取

3.4.2引物的筛选

3.4.3 RT-PCR检测体系的优化

3.4.4常规RT-PCR检测技术的建立

3.4.5一步RT-PCR检测技术的建立

3.5试剂盒的组装

3.5.1组装的试剂盒配方

3.5.2操作方法

3.5.3注意事项

3.6试剂盒的验证

3.6.1灵敏度的测定

3.6.2休眠马铃薯以及同一株植株不同部位的检测

3.6.3与其他试剂盒的比较

3.7黑龙江省PVY株系的普查结果及其分子检测技术的建立

3.7.1黑龙江省PVY株系的普查结果

3.7.2 PVYN、PVYO分子检测技术的建立

3.7.3保存PVYN、PVYO毒源

4讨论

4.1生物学鉴定方法

4.2血清学与分子生物学技术

4.2.1血清学技术

4.2.2分子生物学技术

4.2.3血清学与分子生物学技术的比较

4.3植物总RNA的提取

4.4马铃薯病毒检测试剂盒

4.5普查和鉴定PVYO系、PVYN系

5结论

致 谢

参考文献

附录

攻读硕士期间发表的学术论文