人卵泡液及阿魏酸钠在牛卵母细胞体外成熟中的应用研究

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研究目的：利用屠宰黄牛卵巢，采集卵巢表面2～6mm卵泡卵母细胞 1．研究人卵泡液作为牛卵母细胞体外成熟液的可行性： 2．研究人卵泡液灭活、培养温度、培养体积对牛卵母细胞体外成熟的影响。 3．研究在实验室自配成熟液(常规成熟液)中添加阿魏酸钠对牛卵母细胞体外成熟的影响。研究方法： 1.291个未成熟牛卵母细胞随机分为2组，分别采用人卵泡液和常规成熟液进行成熟培养，比较两种培养液的成熟率的差异。 2.1 724个未成熟牛卵母细胞随机分为3组，常规成熟液为对照组，灭活人卵泡液与不灭活人卵泡液作为实验组，比较三组间成熟率的差异。 2.2 542个未成熟牛卵母细胞均采用人卵泡液为培养液，随机分为4组，分别采用37.5℃、38℃、38.5℃、39℃培养，其余培养条件相同，比较4组间成熟率的差异。 2.3 478个个未成熟牛卵母细胞均采用人卵泡液为培养液，随机分为2组，分别采用四孔板和常规微滴培养，比较两组间成熟率的差异。 3.855个未成熟牛卵母细胞随机分为4组，对照组为常规成熟液，其余三组为添加0.5mg/ml、1mg/ml、2mg/ml阿魏酸钠的常规成熟液，培养条件均相同，比较四组间成熟率的差异。研究结果： 1.人卵泡液组与常规成熟液组成熟率分别为58.5％和63.5％，经过统计学分析，两组间成熟率差异没有显著性意义(P>0.05)。 2.1 常规成熟液培养为成熟牛卵母细胞，成熟率为64.7％，灭活卵泡液组成熟率为37.5％，不灭活卵泡液组成熟率为58.8％。灭活卵泡液组成熟率与对照组相比，差异有显著性意义(P<0.05)；不灭活卵泡液组成熟率与对照组相比，差异没有显著性意义(P>0.05)。 2.2 37.5℃培养的牛卵母细胞成熟率为40.7％，38℃培养的牛卵母细胞成熟率为60.7％，38.5℃培养的牛卵母细胞成熟率为58.1％，39℃培养的牛卵母细胞成熟率为54.1％。37.5℃与38℃、38．5℃、39℃相比，成熟率差异均有显著性意义(P<0.05)：38℃、38.5℃、39℃三组间相比，成熟率间差异均没有显著性意义(P>0.05)。 2.3 四孔板培养牛卵母细胞，体外成熟率为62.1％，常规微滴培养牛卵母细胞，体外成熟率为65.0％，两组比较，差异没有显著性意义(P>0.05)。 3.对照组成熟率为60.1％，含有0.5mg/ml阿魏酸钠的常规成熟液成熟率为44.2％，与对照组相比，差异有显著性意义(P<0.05)。含有1mg/ml阿魏酸钠的常规成熟液53.1％，与对照组相比，差异没有显著性意义(P>0.05)。含有2mg/ml阿魏酸钠的常规成熟液41.6％，与对照组相比，差异有显著性意义(P<0.05)。研究结论： 1.人成熟卵泡液对牛未成熟卵母细胞体外成熟有促进作用，可以作为牛未成熟卵母细胞体外成熟培养液。 2.1 人成熟卵泡液灭活可能会破坏人卵泡液中利于卵母细胞发育成熟的成分，造成卵母细胞成熟障碍，因此，采用人成熟卵泡液作为牛未成熟卵母细胞体外成熟培养液时，卵泡液无须灭活处理。 2.2 采用人成熟卵泡液作为牛未成熟卵母细胞体外成熟培养液时，培养温度设置在38℃比较合适。 2.3 采用四孔板覆盖矿物油培养卵母细胞使卵母细胞密度大且相对集中于培养皿的底部正中间，既有利于观察，又有利于卵母细胞之间间隙连接，发挥其旁分泌作用，促进卵母细胞发育，减少了培养器皿、培养液和试剂的消耗。另外卵母细胞周围携带的大量颗粒细胞足够满足卵母细胞IVM的需要，不必另外收集和制备颗粒细胞，减少了污染细菌的机会，操作也大大简化。 3.含有1mg/ml阿魏酸钠的常规成熟液对牛未成熟卵母细胞体外成熟没有抑制作用。

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作者
戴玲;
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作者单位

湖北中医药大学;

湖北中医学院;

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授予单位湖北中医药大学;湖北中医学院;
学科中西医结合
授予学位硕士
导师姓名张昌军;
年度 2007
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原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类 Q813.11;
关键词
体外成熟; 牛卵母细胞; 人卵泡液; 阿魏酸钠;

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