麻黄连翘赤小豆汤含药血清对胆汁淤积瘙痒模型大鼠离体DRG神经元电生理的影响

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目的前期实验研究发现麻黄连翘赤小豆汤（MLC）能改善变态反应性炎症，本课题将进一步研究麻黄连翘赤小豆汤（MLC）对胆汁淤积性瘙痒的治疗作用。该方临床治疗胆汁淤积性瘙痒疗效显著，但治疗的相关机制尚不明确。本课题选取表达于背根神经的TRPV1通道作为研究的切入点，探讨其作用机制，为进一步研究打下基础。方法本课题采用了手术结扎大鼠胆管，制作胆汁淤积性瘙痒大鼠模型。大鼠造模后即开始进行行为学观察。制备麻黄连翘赤小豆汤含药血清，并采用高效液相色谱-质谱联用（HPLC-MS）方法对含药血清中连翘苷成分进行定量检测。实验分组为空白血清组、5%含药血清组、20%含药血清组，通过急性分离模型大鼠背根神经元（DRG）细胞，进行膜片钳实验。由辣椒素激活TRPV1通道，观测含药血清对通道电流的影响。结果（1）行为学测定：大鼠在造模后一周开始出现不同程度的瘙抓行为，通过行为学检测与空白大鼠行为进行对比，有显著性差异（P<0.05）。（2）液质联用检测：含药血清中存在少量连翘苷成分。（3）大鼠DRG神经元急性分离与培养：镜下观测细胞形态完整，边缘光滑，贴壁性好。（4）膜片钳检测：辣椒素（capsaicin）可以激活DRG细胞的TRPV1通道电流，单独含药血清作用于细胞，发现不能引起任何电流变化；用capsaicin与含药血清叠加作用于细胞，发现含药血清对辣椒素激活的TRPV1通道有明显的抑制作用，空白血清对通道电流没有显著影响（P>0.05）；5%浓度血清与空白血清相比有显著差异性（P<0.05），20%浓度的抑制作用强于5%浓度有差异性（P<0.05）。结论（1）通过行为学检测，胆汁淤积瘙痒大鼠模型的复制是成功的。（2）液质联用测定MLC含药血清中连翘苷的成分定量分析，结果表明MLC含药血清中制备成功；（3）急性分离大鼠DRG神经元及培养，通过镜下观测，说明细胞培养成功；（4）膜片钳实验中，麻黄连翘赤小豆汤含药血清通过作用于TRPV1通道，能够抑制通道电流，减少钙离子内流，从而可能抑制致痒物质的释放，达到治疗胆汁淤积性瘙痒的目的，TRPV1通道可能是MLC治疗胆汁淤积性瘙痒的信号通路之一。

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作者
谭张奎;
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作者单位

湖北中医药大学;

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授予单位湖北中医药大学;
学科中医临床基础
授予学位硕士
导师姓名陶春晖;
年度 2018
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类中药学;
关键词
麻黄连翘赤小豆汤; 含药血清; 胆汁淤积; 瘙痒模型; 大鼠离体; DRG神经元; 电生理;

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