表没食子儿茶素没食子酸酯对大肠杆菌引起的膀胱上皮感染预防和治疗作用的研究

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第一部分：EGCG干预浓度的选择及安全性评估
　　目的：观察不同浓度表没食子儿茶素没食子酸酯(Epigallocatechin gallate,EGCG)无菌溶液对正常小鼠膀胱上皮细胞的影响,探讨合适的实验药物浓度。
　　方法：昆明雌性小鼠36只,随机分成6组,PBS对照组和0.5、1,、2、4、8mmol/LEGCG实验组,每组各6只小鼠;分别灌注PBS缓冲液,和相应浓度的EGCG无菌溶液。24h后,获取标本,并进行病理HE染色观察大体形态和荧光染色观察Uroplakins膜蛋白的完整性,并检测其炎症因子白介素-6和粒细胞集落刺激因子的表达。
　　结果：经病理HE及荧光染色显示,除8mmolEGCG组外,PBS组和其余EGCG组膀胱尿路上皮均未见明显破坏,8mmol/LEGCG实验组可引起尿道上皮部分脱落,各组均无炎症因子的异常表达增高,差异无统计学意义(P>0.05)。
　　结论：小于或等于4mol/LEGCG溶液对膀胱尿路上皮细胞的功能和形态学均无明显影响,可视为适宜的干预。
　　第二部分：关于EGCG对小鼠膀胱上皮大肠细菌感染的预防性作用研究
　　目的：证实表没食子儿茶素没食子酸酯(Epigallocatechin gallate,EGCG)在细菌侵入时对膀胱上皮的预防性保护作用,并评估其对大肠杆菌的抵抗效果。
　　方法：将健康雌性小鼠随机分成0.5、1、2、4mmol/LEGCG共4个组,和PBS组,每个分组包括6只小鼠。将PBS缓冲液和不同浓度的EGCG溶液50μl灌注入相应组别的小鼠膀胱内。24h后,建立小鼠急性细菌性膀胱感染模型,48h后获取标本,进行HE染色和免疫荧光染色观察各组膀胱上皮大体形态和Uroplakins膜蛋白的完整性,并定量测定炎症相关因子白介素-6和粒细胞集落因子的表达水平,根据各组形态学特征和炎症因子表达水平,观察各组效果,根据预防组结果遴选治疗组浓度。
　　结果：1、2、4mmol/LEGCG组炎症因子表达与PBS组相比具有统计学意义(P<0.05),此三组炎症因子表达依次降低,4mmol/L预防组预防效果最佳,,形态学也符合此规律。0.5mmol/L预防组与PBS组相比在炎症因子表达方面无统计学意义(P>0.05),膀胱尿路上皮破坏明显。根据预防组效果遴选1、2、4mmol/L三组作为治疗组。
　　结论：EGCG可以有效抵抗大肠杆菌侵入,表现出良好的抗菌作用,对尿道上皮具有保护作用。
　　第三部分：EGCG对小鼠膀胱上皮大肠细菌感染的治疗性保护作用的研究
　　目的：证实表没食子儿茶素没食子酸酯(Epigallocatechin gallate,EGCG)在细菌侵入后对膀胱上皮的治疗性保护作用,并评估其对膀胱上皮修复的影响。
　　方法：将30只健康雌性小鼠随机分成PBS组、1、2、4mmol/LEGCG共5个组,每个分组包括6只小鼠,将大肠杆菌悬浊液经尿道灌注入膀胱内建立膀胱感染模型,48h后向小鼠膀胱内再次灌注与组别相应浓度的EGCG无菌溶液和PBS缓冲液,7d后处死小鼠,获取膀胱标本,进行行形态学检测包括HE染色和Uroplakins膜蛋白免疫荧光,进行炎症因子表达水平的测定包括白介素-6和粒细胞集落刺激因子的表达。
　　结果：PBS组,1、2、4mmol/LEGCG组,膀胱上皮损伤程度依次减轻,炎症因子表达水平也依次降低(P<0.05)。
　　结论：EGCG具有有效的抗菌作用,并且可以减轻因感染引起的炎症反应,对膀胱粘膜的修复无负面影响或者负面影响较小。

著录项

作者
刘述成;
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作者单位

华中科技大学;

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授予单位华中科技大学;
学科外科学(泌尿外科)
授予学位硕士
导师姓名肖传国,李兵;
年度 2013
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类 R694.3;
关键词
表没食子儿茶素没食子酸酯; Uroplakins膜蛋白; 大肠杆菌; 膀胱上皮感染; 药物浓度;

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