类固醇激素受体共活化因子3(SRC-3)在天然药物治疗恶性血液病中的意义

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本研究分为三部分：
　　第一部分：藤黄酸抑制类固醇激素受体共活化因子3及Akt通路介导慢性粒细胞白血病急变K562细胞株G0/G1期阻滞和凋亡
　　目的：研究藤黄酸抗白血病的影响及其分子机制，为其临床应用提供理论基础。
　　方法：采用MTT 比色法检测K562细胞的增殖活性，Annexin V-FITC/PI 双标法检测细胞凋亡及透射电镜分析细胞凋亡形态学的改变，流式细胞术分析细胞周期改变，Real time-PCR检测藤黄酸对K562细胞内SRC-3和Bcl-2基因表达的影响，Western blot法检测藤黄酸对K562细胞内SRC-3，Akt，pAkt，核糖体蛋白S6激酶1(S6K1)，pS6K1，糖原合成激酶3β(GSK-3β)，pGSK-3β和Bcl-2 蛋白表达的影响。
　　结果：(1)藤黄酸以剂量、时间依赖性方式抑制K562细胞的增殖，其24 h的IC50是1.9±0.1 μmol/L。(2)藤黄酸以剂量依赖性方式诱导K562细胞凋亡，伴有典型的凋亡细胞形态学改变。(3)藤黄酸阻滞K562细胞周期于G0/G1 期。(4)藤黄酸能以剂量依赖性方式抑制SRC-3，pAkt，pS6K1，pGSK-3β和Bcl-2表达水平，而Akt，S6K1和GSK-3β总蛋白水平不受影响。
　　结论：藤黄酸发挥其抗白血病效应可能与下调类固醇激素受体共活化因子3（SRC-3）的表达有关。
　　第二部分：鱼藤素抑制类固醇激素受体共活化因子3及NF-κB通路介导急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞凋亡
　　目的：研究鱼藤素抗白血病的影响及其分子机制，为其临床应用提供理论基础。
　　方法：采用MTT 比色法检测Jurkat细胞的增殖活性，原位细胞凋亡检测技术（TUNEL）及透射电镜分析细胞凋亡形态学的改变，流式细胞术分析细胞周期改变，RT-PCR和Western blot法检测鱼藤素对白血病细胞内SRC-3，NF-κB，Bcl-2,Bcl-xL基因和蛋白表达的影响。
　　结果：(1)鱼藤素以剂量、时间依赖性方式抑制Jurkat细胞的增殖，其24 h的IC50是43.73±0.35 nmol/L，48h的IC50为28.96±0.29 nmol/L。(2)鱼藤素以剂量依赖性方式诱导Jurkat细胞凋亡。40 nmol/L的鱼藤素处理24 h后透射电镜观察到细胞染色质浓缩，核碎裂，典型凋亡小体形成。TUNEL法检测到TUNEL阳性细胞，40 nmol/L的鱼藤素处理24 h后TUNEL阳性细胞百分比为12.8±0.85%，与对照组（1.1±0.09%）相比有统计学意义(P<0.01)；(3)鱼藤素阻滞Jurkat细胞周期于G0/G1 期。(4)鱼藤素能同时在蛋白和基因水平，以剂量依赖性方式抑制SRC-3 及其相关基因NF-κB和其下游的抗凋亡蛋白Bcl-2，Bcl-xL的表达。
　　结论：鱼藤素能明显抑制Jurkat 白血病细胞的增殖，并诱导其凋亡，其抗白血病效应可能与下调类固醇激素受体共活化因子3（SRC-3）的表达有关。
　　第三部分：鱼藤素对多发性骨髓瘤细胞类固醇激素受体共活化因子3的调节作用
　　目的：研究鱼藤素对人多发性骨髓瘤细胞株RPMI-8226细胞抗增殖影响及其分子机制。
　　方法：采用MTT 比色法检测鱼藤素对RPMI-8226细胞增殖活性的影响，Annexin-VFITC/PI 双标法及Hoechst33258 分析细胞凋亡形态学的改变，肿瘤细胞侵袭实验检测鱼藤素对RPMI-8226细胞侵袭作用的影响，RT-PCR法检测鱼藤素对SRC-3和NF-κB基因表达的影响，免疫组化法检测鱼藤素对SRC-3和NF-κB蛋白的影响和分布情况，明胶酶法用来检测RPMI-8226细胞分泌MMP-2和MMP-9酶的活性。
　　结果：(1)鱼藤素能明显抑制RPMI 8226细胞的增殖，其24 h的IC50是54.55±0.40nmol/L。(2)鱼藤素以剂量依赖性方式诱导RPMI-8226细胞凋亡，伴有典型的凋亡细胞形态学改变。(3)鱼藤素能以剂量依赖性方式抑制RPMI-8226细胞侵袭。(4)鱼藤素能同时在蛋白和基因水平抑制SRC-3 及其相关基因NF-κB，从而下调MMP-2和MMP-9酶的活性。
　　结论：鱼藤素发挥其抗多发性骨髓瘤效应可能与下调SRC-3的表达有关。

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作者
李睿;
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作者单位

华中科技大学;

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授予单位华中科技大学;
学科内科学(血液病学)
授予学位博士
导师姓名陈燕;
年度 2009
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类白血病;
关键词
藤黄酸; 类固醇激素受体共活化因子3; 恶性血液病; 天然药物; 鱼藤素; 抗白血病效应;

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