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目 录
摘 要
ABSTRACT
缩略语表
1 前言
1.1根瘤菌与豆科植物共生固氮体系的建立
1.1.1根瘤菌与豆科植物之间的相互识别
1.1.2根瘤菌侵染豆科植物中侵染线的形成
1.1.3共生体的形成
1.1.4类菌体分化的调控
1.1.5共生过程酶的参与
1.2糖苷水解酶25家族蛋白的分类及功能
1.3 溶菌酶在共生过程的机制
1.3.1 溶菌酶的结构及功能
1.3.2 溶菌酶作用的机制
1.3.3溶菌酶与免疫
1.3.4 溶菌酶与共生固氮
1.4研究目的及意义
1.5 技术路线
2.1 实验材料
2.1.1实验所用植物材料
2.1.2 实验所用菌株与质粒
2.1.3 实验所用抗生素
2.1.4 实验所用引物序列
2.1.5 主要试剂配制方法
2.1.6 培养基
2.1.7 实验所用酶及其试剂盒
2.2 实验方法
2.2.1 基本分子生物学操作
2.2.2 7653R电转化感受态制备
2.2.3 Cre-LoxP系统双交换突变体构建
2.2.4 两亲本接合转移
2.2.5 Western-blot验证
2.2.6溶壁微球菌肽聚糖提取
2.2.7重叠延伸PCR扩增（SOE-PCR）
2.2.8 MurD1溶菌酶酶活性的测定
2.2.9 反应热力学
2.2.10蛋白小量诱导表达
2.2.11荧光定量PCR
2.2.12 固氮酶活的测定
2.2.13 GUS染色
3 结果与分析
3.1 MurD1蛋白结构的生物信息学分析
3.2 murD1突变体构建及共生表型鉴定
3.2.1 交换载体的构建及筛选
3.2.2共生表型的测定
3.2.3 murD1突变株共生植株的根瘤石蜡切片观察
3.2.4 murD1突变株共生植株的根瘤电镜切片观察
3.3 murD1突变株的功能互补
3.3.1互补载体的构建
3.3.2互补菌株的共生表型鉴定
3.4 murD1基因过表达及共生表型
3.4.1过表达菌株的构建及验证
3.4.2过表达菌株的共生表型鉴定
3.5 murD1共生固氮中的表达特征分析
3.5.1 共生条件下murD1的时空表达动态
3.5.2共生条件下murD1的时空组织表达特点
3.6 体外检测分析MurD1的生化活性
3.6.1 murD1序列密码子优化
3.6.2 蛋白表达载体的构建
3.6.3 MurD1蛋白纯化及Western鉴定
3.6.4 MurD1蛋白酶活测定
3.6.5 MurD1蛋白热力学分析
3.7 7653R中另外三个溶菌酶基因murD2/murD2/murD4的功能分析
3.7.1 三个murD基因的氨基酸结构特征分析
3.7.2 三个murD基因的突变体构建
4总结与讨论
4.1 总结
4.2 讨论
4.3 展望
参考文献
致 谢
附 录
