2014年1月-2016年3月猪伪狂犬病病毒的分离鉴定

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伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus，PRV）是一种能够引起多种家畜及野生动物罹患伪狂犬病的病毒，可以通过接种疫苗对该病毒的感染进行积极的防御，但是2011年末新出现的PRV变异毒株使得伪狂犬病突然变为高度流行状态，为了解PRV变异毒株在我国不同地区规模化猪场中的流行情况，本研究对2014年1月-2016年3月来源于我国15个省份67家规模化猪场的201份临床样品进行了PRV的分离与鉴定，并对所分离的毒株进行了gB、gC和gE基因的序列分析、基因组限制性片段长度多态性（RFLP）分析及抗原差异性分析等研究，从而为掌握 PRV在我国的流行情况及其分子生物学特征奠定基础。主要研究内容如下：
　　1.PRV的分离与鉴定
　　自2014年1月至2016年3月，本研究从湖北、河南、山东、安徽、江西、上海、浙江、江苏、北京、内蒙、广西、四川、甘肃、湖南、广东15个省份67家规模化猪场的201份临床样品中分离到了29株PRV，并对其进行了PCR鉴定、细胞病变观察、空斑纯化（3轮）及稳定传代。
　　2.病毒分离株gB、gC及gE基因的测序与分析
　　针对所分离PRV毒株的主要毒力基因gB、gC及gE进行测序及序列分析。结果表明，所分离的29株PRV毒株之间具有较高的同源性，其gB、gC及gE基因的核苷酸序列最大差异分别为0.17％、0.19％和0.41％，氨基酸序列最大差异分别为0.77％、0.66％和0.99％。另外，这29株PRV与参考毒株之间gB、gC及gE基因核苷酸序列最大差异分别为1.82％、2.87％和2.85％，氨基酸序列最大差异分别为5.11％、7.48％和4.53％。
　　氨基酸序列比对结果表明，与Bartha-K61毒株等国外经典毒株和鄂A毒株(Ea毒株)等国内2010年之前流行的部分毒株相比这29株PRV分离株的gB、gC及gE基因氨基酸序列均存在特征性的插入、缺失及替换等特征性的变异。
　　gB、gC及gE基因遗传进化分析结果表明，所分离病毒中有26株PRV在这三个基因上均处于一个相对独立的遗传进化分支，与已经报道的PRV-HeN1毒株等PRV变异毒株（An et al2013）属于同一亚群，与Ea毒株等国内2010年之前流行的毒株亲缘关系较远；有趣的是，另外3株PRV表现出不同的特点：其中2株PRV的gC基因与PRV-HeN1变异毒株位于同一分支，gE基因位于其他遗传进化分支；另外1株PRV的gE基因与PRV-HeN1变异毒株位于同一分支，gC基因位于其他遗传进化分支，但是这3株PRV与Ea毒株等国内2010年之前流行的毒株亲缘关系也较远。这说明了本研究所分离毒株主要为 PRV变异毒株，并且与双城毒株（SC毒株）、Ea毒株等经典毒株有着共同的进化来源，均来自中国早期流行的毒株。
　　3.病毒分离株的基因组限制性片段长度多态性（RFLP）分析
　　用限制性内切酶BamH I对本研究所分离PRV、Ea毒株和Bartha-K61毒株进行RFLP分析，结果表明本研究所分离的PRV毒株与Ea毒株及Bartha-K61毒株均具有较大的差异，并且本研究所分离的PRV毒株间表现出4种不同的酶切形态。
　　4.病毒分离株的抗原差异性分析
　　用Ea毒株、Bartha-K61毒株及CH/SMX/2012毒株（本实验室2012年分离的PRV变异毒株）制备的高免血清分别对 Ea毒株、Bartha-K61毒株、CH/SMX/2012毒株及本研究所分离的部分PRV毒株进行病毒交叉中和实验，结果表明Bartha-K61毒株及Ea毒株高免血清对自身的中和效价均较高，分别达到217.40和624.34，对本研究所分离 PRV的中和效价均较低，分别为90.19±43.05和242.36±69.58；CH/SMX/2012毒株高免血清对自身、Ea毒株、Bartha-K61毒株及本研究所分离PRV的中和效价均较高，分别为547.64、603.72、654.52和577.59±54.72，表明本研究所分离的PRV毒株与Bartha-K61毒株、Ea毒株等经典毒株相比某些抗原发生了明显改变，但是与CH/SMX/2012毒株有较高的同源性。

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作者
高泽文;
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作者单位

华中农业大学;

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授予单位华中农业大学;
学科兽医
授予学位硕士
导师姓名吴斌,汤细彪;
年度 2016
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总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类病毒病;
关键词
伪狂犬病病毒; 分离鉴定; 生物学特征; 流行特征;

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