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西瓜根腐病病原学研究及防治方法的初探

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摘要

缩略词表

1 前言

1.1 西瓜根部病害的研究进展

1.1.1 病原真菌引起的西瓜根部病害

1.1.2 病原线虫引起的西瓜根部病害

1.1.3 西瓜根部病害的防治方法

1.2 镰刀菌属的研究进展

1.2.1 镰刀菌的分类

1.2.2 镰刀菌的鉴定

1.3 研究的目的、意义和内容

2 材料与方法

2.1 试验材料

2.1.1 供试菌株

2.1.2 供试植物

2.1.3 供试药剂

2.2 试验方法

2.2.1 病原菌的分离

2.2.2 病原菌致病性验证

2.2.3 病原菌的鉴定

2.2.4 病原菌生物学特性的研究

2.2.5 病原菌侵染途径的观察

2.2.6 室内药剂筛选

2.2.7 抗性砧木筛选

2.3 数据处理

3 结果与分析

3.1 病原菌的分离

3.2 病原菌致病性验证

3.3 病原菌的鉴定

3.3.1 形态学鉴定

3.3.2 分子鉴定

3.3.3 专化型和生理小种的鉴定

3.4 病原菌生物学特性的研究

3.4.1 温度对菌丝生长及产孢的影响

3.4.2 pH对菌丝生长及产孢的影响

3.4.3 不同碳源对菌丝的生长及产孢的影响

3.4.4 不同氮源对菌丝的生长及产孢的影响

3.5 病原菌侵染途径的观察

3.6 室内药剂筛选

3.7 抗性砧木筛选

4 结论与讨论

4.1 病原菌的分离和鉴定

4.2 病原菌生物学特性研究

4.3 病原菌侵染途径观察

4.4 室内药剂筛选

4.5 抗性砧木筛选方法和分级标准

参考文献

附录

附录Ⅰ 课题资助项目

附录Ⅱ 硕士期间发表论文

附录Ⅲ 供试培养基

致谢

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摘要

西瓜根腐病是由半知菌亚门真菌引起的病害,近年来逐渐成为我国西瓜产区的主要病害之一,据报道自根西瓜和嫁接西瓜都可以感病,造成了严重的经济损失。嫁接技术是防治西瓜根部病害发生的有效手段,目前我国嫁接西瓜的普及率达到了40%,但是生产上发现嫁接后的西瓜仍会发生根腐病,且有逐年加重的趋势。目前相关的研究比较少,关于西瓜根腐病病原学及防治方法的系统研究还是空白。本试验通过对西瓜根腐病菌的分离和鉴定,生物学特性,侵染途径和防治方法的研究,旨在弄清西瓜根腐病的致病菌及其生物学特性、探究西瓜根腐病菌的侵染途径并提出科学合理的防治方法,具体研究结果如下:
  1.采用常规组织分离及单孢纯化的方法共获得了53个分离物,通过形态学观察,参照Nelson镰刀菌分类系统进行鉴定,初步将分离物鉴定为茄病镰刀菌(F.solani)、F.commune、串珠镰刀菌(F.verticillioide)、层出镰刀菌(F.proliferatum)。其中,F.solani有23个、F.commune有15个、F.verticillioide有8个、F.proliferatum有7个,分别占44.3%、28.5%、15.1%、13.2%。
  2.采用孢子悬浮液蘸根接种法(106个/mL)对53个分离物进行致病性验证,筛选出致病菌Fs-8。采用EF-1α基因序列分析对结果进行了验证,发现Fs-8与F.solani(FN689821.1、FN689824.1、FN689827.1)相似率高达100%;采用MEGA5.0软件以Neighbor-Joining法构建系统进化树,结果表明Fs-8与F.solani的亲缘关系最近,位于进化树的同一支,与形态学鉴定结果一致。
  3.采用接种法和特异性引物对病原菌的专化型和生理小种进行了鉴定,结果表明Fs-8对西瓜、南瓜、葫芦幼苗和西瓜果实都具有致病性。采用茄病镰刀菌瓜类专化型1号生理小种特异性引物(Fsc1-EF1/Fsc1-EF2)进行验证,可以获得预期的特异性条带(505bp)。最终将西瓜根腐病的病原菌鉴定为茄病镰刀菌瓜类专化型1号生理小种(Fusariumsolanif.sp.cucurbitaerace1)。
  4.采用PDA培养基和真菌生理培养基,分别研究了不同温度、pH、碳源、氮源对Fs-8生长和产孢的影响,结果表明最适合该菌生长和产孢的温度范围是28℃~30℃;pH范围是5~10;该菌可以利用多种碳源;在KNO3,Ca(NO3)2,NaNO3等硝态氮源培养基上生长的较好,在(NH4)2SO4,NH4Cl等铵态氮源上生长的最较差。
  5.采用组织化学染色的方法,研究了Fs-8侵染途径。结果表明Fs-8通过伤口进入西瓜根部以后,首先以菌丝在皮层薄壁细胞间隙缓慢扩展,使细胞破溃;进而在细胞破溃的部位产生厚垣孢子;接着厚垣孢子转移到新的部位并萌发形成菌丝,继续进行侵染。
  6.采用含毒介质法,研究了甲基托布津、多菌灵、代森锰锌、苯醚·咪鲜胺、世高、绿亨一号、拿敌稳7种化学药剂对Fs-8生长的抑制作用。抑菌效果最好的是苯醚·咪鲜胺、拿敌稳和多菌灵,EC50分别为0.7261μgmL-1,0.7529μgmL-1,0.8774μgmL-1。
  7.采用孢子悬浮液蘸根接种法(106个/mL)对76个砧木品种进行抗病性鉴定,筛选出了RSH2、RSN7、RSN11、RSN15、RSN22、RSN30六份抗性较强的砧木材料。

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