首页> 中文学位 >甜瓜转录因子全基因组预测及ARF转录因子家族分析
【6h】

甜瓜转录因子全基因组预测及ARF转录因子家族分析

代理获取

目录

声明

摘要

缩略词表

1.前言

1.1 课题的提出

1.2 国内外研究进展

1.2.1 转录因子

1.2.2 与逆境相关的转录因子家族

1.2.3 ARF转录因子家族

1.2.4 内参基因

1.3 研究的目的和内容

1.3.1 研究的目的

1.3.2 研究的内容

2.材料与方法

2.1 甜瓜转录因子的预测

2.1.1 转录因子家族鉴定标准

2.1.2 转录因子基因家族隐马尔科夫模型的获得和构建

2.1.3 甜瓜转录因子家族基因预测

2.2 甜瓜ARF转录因子家族特征分析

2.3 甜瓜内参基因的筛选

2.3.1 植物材料及生长环境

2.3.2 实验处理

2.3.3 候选内参基因选择

2.3.4 基因序列获得

2.3.5 引物设计

2.3.6 数据分析

2.4 ARF转录因子甜瓜果实发育过程中的表达分析

2.4.1 植物材料与生长环境

2.4.2 实验处理

2.5 RNA的提取与eDNA第一条链的合成

2.5.1 根系、叶片中RNA的提取

2.5.2 果实中RNA的提取

2.5.3 RNA质量检测

2.5.4 cDNA第一条链的合成

2.7 实时定量PCR分析

2.8 数据处理

3.结果与分析

3.1 甜瓜全基因组转录因子家族预测

3.2 甜瓜ARF遗传因子家族特征分析

3.2.1 甜瓜ARF转录因子家族成员

3.2.2 甜瓜ARF基因结构分析

3.2.3 甜瓜ARF转录因子蛋白的保守序列分析

3.2.4 甜瓜ARF转录因子蛋白的系统进化分析

3.2.5 ARF转录因子与甜瓜Unigenes的比对分析

3.3 甜瓜内参基因的筛选

3.3.1 甜瓜内参基因的筛选

3.3.2 甜瓜内参基因引物特异性鉴定

3.3.3 引物扩增效率和标准曲线绘制

3.3.4 内参基因表达稳定性分析

3.4 甜瓜ARF转录因子家族在果实发育中的表达分析

3.4.1 甜瓜ARF转录因子家族基因表达分析

4 讨论

4.1 甜瓜转录因子家族预测

4.2 甜瓜内参基因的筛选

4.3 ARF转录因子家族分析

参考文献

致谢

展开▼

摘要

甜瓜(Cucumis melo.L)属于葫芦科甜瓜属,是主要的园艺作物之一,在全世界都有广泛的种植,具有十分重要的经济价值。转录因子参与了许多重要的调控过程,是功能基因组学研究的重要内容之一。2012年甜瓜基因组测序的完成以及数据库的建立为全基因组预测、分析转录因子家族提供了机遇。本研究在全基因组水平上预测了甜瓜转录因子家族基因,筛选出了可用于转录因子基因定量表达分析的内参基因,并重点分析了ARF家族的特征,获得了以下研究结果:
   ⑴从Pfam数据库中下载了46个转录因子家族的隐马儿科夫模型,同时自己建立了10个转录因子家族的隐马儿科夫模型,利用这些模型在甜瓜全基因组上共鉴定出56个转录因子基因家族,包含1558个转录因子基因。成员数量排在前10位的转录因子家族分别是bHLH(133)、ERF(126)、bZIP(116)、MYBrelated(107)、C2H2(94)、NAC(82)、MYB(76), G2-like(65), WRKY(60), NF-YC(52)。
   ⑵对甜瓜全基因组中的15个ARF转录因子家族基因特征进行了分析。甜瓜ARF家族基因中内含子的数量为2~21个,大部分基因有10~20个内含子,存在3种转录模式;甜瓜ARF编码蛋白的N端含有保守的DNA结合域,家族基因可以根据蛋白序列特征分为3类。
   ⑶选取了ACT7、GAPC2、RAN、RPL、RPL2、ADP、TUA、EF1α、RPL36aA、PP2A、UBC2、ACT、18SrRNA、UBI-ep14个候选内参基因,用RT-qPCR检测了其在生物胁迫(枯萎病、根腐病和细菌性果斑病)、非生物胁迫(干旱、低温和盐胁迫)、植物生长调节剂处理(GA、NAA、ABA、SA,MeJA,乙烯)的根和叶中,及果实不同发育阶段下表达水平,利用GeNorm、NormFiner和BestKeeper软件系统分析了这些候选内参基因表达的稳定性。GeNorm分析表明:在所有样品中ADP和UBI-ep表达最为稳定;在根中ADP和RAN表达最为稳定;在叶片中GAPC2和RAN表达最为稳定;在生物胁迫中TUA和ACT表达最为稳定;在非生物胁迫下ADP和RPL表达最为稳定;在植物生长调节剂处理的叶片中RAN和ACT表达最为稳定;在甜瓜果实发育过程中,RAN和PP2A表达最为稳定。NormFinder分析表明,除了在根中RPL和果实中RAN表达最为稳定外,在其它实验条件和器官中都是ADP表达最为稳定。在BestKeeper分析中,候选内参基因的整体表现稳定的是18 SrRNA、RPL和RAN。
   ⑷用筛选出的RAN为内参,分析了ARF家族基因人工授粉和CPPU处理后果实不同发育阶段的表达(0d、7d、14d、21d、27 d、31 d),发现,MELO3C011372、MELO3C014232、MELO3C019801、MELO3C025777在果实发育过程中显著上调表达,MELO3C002771、MELO3C003768、 MELO3C005761、MELO3C025070、MELO026161的表达显著下调。MELO3C025758、MELO3C007251、MELO3C007104、MELO3C03938在人工授粉和CPPU处理后的果实发育过程中表现出了不同的表达模式,其中,MELO3C025758、MELO3C007251在人工授粉果实中的表达显著高于CPPU处理,MELO3C007104、MELO3C03938却显著下降,表明,MELO3C007104、MELO3C03938可能参与了对CPPU信号的响应,从而调控甜瓜果实的单性结实。

著录项

相似文献

  • 中文文献
  • 外文文献
  • 专利
代理获取

客服邮箱:kefu@zhangqiaokeyan.com

京公网安备:11010802029741号 ICP备案号:京ICP备15016152号-6 六维联合信息科技 (北京) 有限公司©版权所有
  • 客服微信

  • 服务号