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运用多种免疫分析方法对磷化蛋白p53进行定量检测

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摘要

绪论

1.1 磷化蛋白p53

1.1.1 p53基因和p53蛋白的作用和结构

1.1.2 磷化蛋白p53与癌症肿瘤以及应用前景

1.2 脂质体的制备和修饰

1.2.1 脂质体的制备方法

1.2.2 脂质体与抗体连接方法

1.2.3 脂质体的应用

1.3 氧化锌以及氧化锌量子点(ZnO QDs)

1.3.1 氧化锌量子点(ZnO QDs)的制备

1.3.2 氧化锌以及氧化锌量子点(ZnO QDs)的应用

1.4 “三明治”免疫复合物的检测方法

1.5 论文选题的思路及主要内容

参考文献

第二章 以免疫层析试纸条为基底通过人体血糖仪快速检测磷化蛋白的含量

2.1 前言

2.2 实验部分

2.2.1 试剂和仪器

2.2.2 封装葡萄糖的脂质体(GEL)的制备

2.2.3 p5315Ab2-封装葡萄糖脂质体(p531SAb2-GEL)的制备

2.2.4 p5315Ab1-Fe3O4的制备

2.2.5 构造ITS免疫平台来检测目标蛋白

2.3 结果与讨论

2.3.1 脂质体的结构表征

2.3.2 实验体系中的信号来源以及选择特异性

2.3.3 试纸条免疫体系的条件优化

2.3.4 免疫复合物的检测线性以及实际应用

2.4 本章小结

参考文献

第三章 ZnO量子点负载石墨烯上通过电化学方波伏安法进行检测应用

3.1 前言

3.2 实验部分

3.2.1 试剂和仪器

3.2.2 氨基化ZnO QDs的合成

3.2.3 p53392Ab2-GO-ZnO QDs复合载体的制备

3.2.4 合成免疫基底p53392Ab1-Fe3O4

3.2.5 构造电化学免疫免疫平台来检测p53392含量

3.3 结果与讨论

3.3.1 GO,ZnO QDs以及GO-ZnO QDs复合物的表征

3.3.2 验证实验体系中的信号来源及其选择性

3.3.3 实验条件的优化

3.3.4 通过方波伏安法来检测免疫复合物的线性及其实际应用

3.4 结论

参考文献

第四章 利用ZnO量子点和类石墨烯量子点形成的量子点簇通过荧光仪来测磷化蛋白

4.1 前言

4.2 实验部分

4.2.1 试剂和仪器

4.2.2 氨基化氧化锌量子点(ZnO QDs)的制备

4.2.3 类石墨烯量子点(GQDs)的合成

4.2.4 p53392Ab2-GQD-ZnO QDs复合标记物的制备

4.2.5 构造“三明治”结构的免疫复合物

4.3 结果与讨论

4.3.1 ZnO QDs以及GQD-ZnO QDs复合物的表征

4.3.2 实验体系中的信号来源以及体系的选择性

4.3.3 实验条件的优化

4.3.4 利用荧光检测p53392抗原的线性及其实际应用

4.4 本章小结

参考文献

致谢

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摘要

很多课题组都对免疫体系的构造进行了广泛研究,常以各种纳米粒子作为载体来进行信号放大然后经过检测方法来定量分析目标物。简便快捷的方法在医疗诊断、食品分析、以及环境保护等领域的应用上有着巨大的前景。依照目前的社会发展趋势以及需求,创建一种新颖的、便携式、高效能、低消费的方法是极其重要的,所以本论文以磷化蛋白p53作为目标分析物运用不同的方法来进行定量检测。
  在生活中磷化蛋白p53和很多肿瘤以及癌症有关,我们尝试运用以下三种方法来实现对其检测并致力于更好的探究运用与实际生活中,实验方法如下:
  1.以便携式的免疫层析试纸条作为衬底,在上面构造免疫体磷化蛋白捕获抗体(p5315Ab1)-Fe3O4/抗原(Ag)/封装葡萄糖脂质体(GEL)-磷化蛋白检测抗体(p5315Ab2),然后利用曲拉通-100裂解脂质体脂肪葡萄糖即可被人体血糖仪检测到。该方法突出了试纸条和血糖仪的便携式且操作方便消耗少。
  2.基于氧化锌量子点(ZnO QDs)是一种新“绿色化学”材料,无毒性、合成方便和生物兼容性,且石墨烯氧化物(GO)比表面积大可负载大量ZnO QDs等特点,将GO-ZnO QDs选作信号放大物以及磁纳米作为基底,然后通过电化学工作站方波伏安法来检测电信号并获得较低检测限。利用此方法成本低、便于制备而且磁纳米具有快速分离提纯等特性使得消耗少,操作方便,利用电化学检测时更加节省时间且较高的灵敏度。
  3.本次实验方法是对2中所探讨的ZnO QDs的另一种性质的探讨。ZnO QDs具有荧光性,为了将信号放大,于是选择两种带荧光的粒子结合一体来进行研究,观察到荧光出现非叠加式增强。即是,GQDs和ZnO QDs糅合成一体形成一种量子点簇,且二者制备都很简单,运用的药剂和仪器都很常见,这就奠定了我们这次实验能顺利开展的基础,而且荧光检测无需复杂数据处理,检测时间段等特性也具有广泛操作性。
  实验1注重的是检测的方便性和携带性其目的是不拘泥于实验室努力走向生活;实验2,3则是对于ZnO QDs这种比较新的材料进行两方面的应用,一方面是利用其电化学特性可以检测到低含量的物质,另一方面利用其荧光特性来快速检测且无需复杂后期处理。不管是那一种方法都需要经济适用,对环境污染少才能长效持久的发展。

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