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番茄高效离体再生体系的建立与番茄COI1同源基因的转化

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第一章前言

1.1茉莉素

1.1.1茉莉素(JAs)的分布及结构

1.1.2茉莉素的生物合成

1.1.3茉莉素的生物功能

1.1.4茉莉素作用机理研究

1.1.5茉莉素调控基因研究进展

1.2番茄

1.2.1番茄离体培养的研究进展

1.2.2番茄遗传转化研究进展

1.3影响转化率的主要因素

1.3.1植物基因型与转化受体

1.3.2农杆菌的菌液浓度和侵染时间

1.3.3 外植体的抑菌培养

1.3.4外植体的预培养

1.3.5番茄遗传转化中存在的问题

1.4本研究的目的和意义

第二章番茄高效离体再生体系的建立

2.1材料与方法

2.1.1材料

2.1.2方法

2.2结果与分析

2.2.1浸泡与暗培养对无菌苗形成的影响

2.2.2激素对诱导生芽的影响

2.2.3激素对诱导生根的影响

2.2.4试管苗的移栽结果

2.3讨论

2.3.1浸泡、暗培养对无菌外植体的影响

2.3.2培养基中激素对不定芽的影响

2.3.3下胚轴作为转化受体的优缺点

2.3.4不同移栽土对试管苗的影响

2.3.5 外植体的褐变

第三章tCOIl基因的遗传转化

3.1材料与方法

3.1.1材料

3.1.2方法

3.2结果与分析

3.2.1 外植体Kan抗性水平测定

3.2.2预培养时间对番茄叶盘转化的影响

3.2.3农杆菌不同接种时间对番茄子叶转化的影响

3.2.4农杆菌与外植体共培养时间对番茄叶盘转化的影响

3.2.5洗涤方法对抑菌的影响

3.2.6转化子的筛选

3.2.7 PCR检测结果

3.2.8转基因植株子代Kan抗性分离

3.3讨论

3.3.1关于抗生素卡那霉素(Kan)的使用浓度

3.3.2关于转化条件的优化

3.3.3关于后期工作

参考文献

致谢

作者简介

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摘要

本研究以番茄常规品种CY-1、CY-2为试验材料,比较系统地研究了影响番茄离体再生的诸多因素,如外植体的培养条件、外植体类型、外源激素种类及组合、外植体生理状态等,建立了番茄子叶高效离体再生体系,从而为番茄的遗传转化研究与应用奠定了基础。试验结果表明:浸泡、暗培养能获得较整齐一致的子叶;不同激素组合及配比对番茄子叶不定芽再生有不同的影响,6-BA对不定芽的再生效果明显优于Zt,CY-1、CY-2子叶在MS+2.0mg/L6-BA+0.02mg/LIAA的选择性培养基上不定芽再生频率可达95﹪以上,平均每子叶再生芽数达4个;同一基因型的番茄子叶再生效果比下胚轴好,而其中又以9d左右叶龄的子叶再生能力最高,不定芽在MS+0.1mg/LBA+0.3mg/LIAA生根培养基中,生根率达75﹪。

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