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华蟾素及其复方对骨癌痛大鼠背根神经节中阿片受体表达的影响及其机制探讨

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引言

材料与方法

1.1 材料

1.1.1实验动物

1.1.2实验药物与试剂

1.1.3主要实验仪器

1.2 实验方法

1.2.1药物及试剂准备

1.2.2 Walker-256细胞的培养

1.2.1骨癌痛大鼠模型的制作

1.2.2行为学机械痛阈值的检测

1.2.3行为学热痛阈值的检测

1.2.4骨肿瘤组织HE染色

1.2.5骨癌痛模型大鼠X光

1.2.6 ELISA检测骨癌痛大鼠外周血中β-END含量

1.2.7 RT-PCR测定背根神经节中μ-OR、δ-OR mRNA的表达

1.2.8免疫组化检测背根神经节中μ-OR、δ-OR表达

1.2.9 Western Blot 法检测华蟾素对骨癌痛大鼠背根神经节中 CXCL1、CXCR2、SP、CGRP表达的影响

1.3统计分析

结果

第一部分大鼠骨癌痛模型的制作

1.1 骨癌痛大鼠机械痛阈值的变化

1.2 骨癌痛大鼠热痛阈值的变化

1.3 骨癌痛模型大鼠病理切片结果(HE染色)

1.4 骨癌痛模型大鼠X光结果

第二部分 华蟾素对骨癌痛模型大鼠背根神经节中阿片受体及相关指标表达情况的影响

2.1 华蟾素对骨癌痛模型大鼠机械痛阈值的影响

2.2 华蟾素对骨癌痛模型大鼠热痛阈值的影响

2.3华蟾素对骨癌痛大鼠外周血中β-END含量的影响

2.4 华蟾素对骨癌痛大鼠背根神经节中阿片受体 mRNA 相对表达量的影响

2.5华蟾素对骨癌痛大鼠背根神经节中阿片受体表达的影响

2.6华蟾素对骨癌痛大鼠背根神经节中CXCL1、CXCR2、SP、CGRP表达的影响

讨论

1大鼠骨癌痛模型的制备

2 华蟾素对骨癌痛模型大鼠背根神经节中阿片受体及相关指标表达情况的影响

小结

参考文献

综述: 骨癌痛病理机制的研究进展

后记

附录:攻读硕士学位期间发表的部分学术论著

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摘要

目的:本课题旨在建立大鼠骨癌痛模型的基础上,探讨中药华蟾素对骨癌痛大鼠背根神经节中阿片受体表达的影响,及其对神经递质的影响,进一步了解华蟾素治疗癌痛的机制,为华蟾素临床应用打下坚实的基础。
  方法:
  1、大鼠骨癌痛模型的建立:选取SD大鼠20只,随机分为假手术对照组与模型组,模型组大鼠采取胫骨髓腔内注射Walker-256乳腺癌细胞的方式造模。分别于造模前,造模第2、5、7、9、12、14天检测各组大鼠左右后肢机械痛阈值和热痛阈值,并采用HE染色和X光检测骨癌痛模型大鼠胫骨髓腔破环情况。
  2、华蟾素对骨癌痛大鼠背根神经节中阿片受体表达的影响及其机制探讨:选取SD大鼠50只,随机分为假手术对照组、模型组、吗啡组、华蟾素组、QHF组,除假手术对照组外,其余各组大鼠均采用以上方式造模。造模第7天开始给药,假手术对照组和模型组大鼠腹腔注射生理盐水,吗啡组腹腔注射盐酸吗啡注射液,华蟾素组腹腔注射中药华蟾素,QHF组采取灌胃的方式给予中药复方QHF,连续给药8天。分别于造模前,造模第2、5、7、9、12、14天检测各组大鼠左右后肢机械痛阈值和热痛阈值,采用ELISA法检测各组大鼠外周血中β-END的含量,RT-PCR检测各组大鼠背根神经节中MOR和DOR的相对表达量,免疫组化检测各组大鼠背根神经节中μ-OR、δ-OR的表达,Western blot测定各组大鼠背根神经节中CXCL1、CXCR2、SP和CGRP的表达。
  结果:
  1、大鼠骨癌痛模型的建立:造模后,模型组大鼠机械痛阈值和热痛阈值逐渐降低,造模第7天与对照组比较差异有统计学意义,模型组右后肢相对左后肢痛阈值显著降低,差异有统计学意义;病理切片及X光结果显示模型大鼠胫骨髓腔破环明显,提示造模成功。
  2、华蟾素对骨癌痛大鼠背根神经节中阿片受体表达的影响及其机制探讨:造模后,模型组大鼠机械痛阈值和热痛阈值逐渐降低,第7天开始给予药物处理后,其痛阈值均有不同程度升高,相对模型组差异有统计学意义,其中中药复方QHF升高最为明显;模型组大鼠外周血中β-END的含量相对对照组显著降低,给药后β-END的含量均有所升高,且中药华蟾素组与QHF组升高较吗啡组显著;造模后,模型组大鼠μ-OR、δ-OR的mRNA及蛋白水平均有所降低,给药后各给药组均有不同程度升高;模型组大鼠背根神经节中CXCL1、CXCR2、SP和CGRP相对对照组显著升高,而给药后各给药组CXCL1、SP和CGRP与模型组比较均有显著降低。
  结论:
  1、成功构建骨癌痛模型。
  2、华蟾素能升高骨癌痛大鼠背根神经节中阿片受体的表达,并通过阿片受体与阿片肽结合后抑制神经递质SP和CGRP的表达,最终减少疼痛的传递抑制癌痛的发生发展。

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