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低木质素转基因挪威云杉的植株再生及功能基因表达的微阵列检测

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目录

缩略词简表

论文摘要

第一部分文献综述

1前言

2挪威云杉的转基因育种

3木质素生物合成的转基因调控

3.1木质素的种类和分布

3.2木质素生物合成途径

3.3木质素生物合成的基因调控

3.4木质素基因调控研究的趋势

4微阵列(Microarray)技术

4.1微阵列技术的发展

4.2微阵列技术基础

4.3微阵列技术的应用

第二部分论文正文

1低木质素转基因挪威云杉的胚胎诱导和植株再生

1.1引言

1.2材料和方法

1.3结果与分析

1.4结论与讨论

2转基因挪威云杉反义CCR基因表达的RT-PCR鉴定

2.1引言

2.2材料和方法

2.3结果与分析

2.4结论和讨论

3转基因挪威云杉功能基因表达的微阵列检测

3.1引言

3.2材料和方法

3.3结果与分析

3.4结论和讨论

4本研究的创新点

主要参考文献

Abstract(英文摘要)

致谢

作者简介

附录

附表1:微阵列构建的384个基因功能简表

附表2:四个96孔母碟的基因构建序列

附表3:三个芯片膜印制碟的基因构建序列

附表4:各个亚系在不同发育阶段间的Pearson相关系数

附表5:各亚系与对照比较及三个不同发育阶段比较的基因表达差异显著性检验

附表6:转基因亚系在各个生长发育阶段与对照比较的基因表达差异显著性检验

附图1:各亚系表达强度平均值及对数变换后的频率分布比较

附图2:各亚系经不同方法正态化后与对照的线性回归比较

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摘要

该项目研究的目的就是采用瑞典农业大学构建的反义ccr基因转导的挪威云杉细胞愈伤组织,通过诱导产生再生植株,并检测证实该基因是否表达及其它相关基因的表达状况,为培育出低木质素的转基因挪威云杉新品种奠定物质和理论基础.以转基因亚系A78-3、A78-4、A78-5和未转基因对照A95∶88∶22的细胞愈伤组织为实验材料,以DKM和LP-M熟化培养基培养五周后,再以1/4SH萌发培养基培养四周,成功地诱导形成了胚胎,并再生成新的小植株,萌发成活率达到80﹪.从继代培养的愈伤组织和再生小植株中分别分离总RNA,经RT-PCR检测反义ccr目标基因的表达情况.结果显示:在愈伤组织和再生小植株中,A78-3和A78-4两个亚系都有很明显的反义带,但A78-5没有出现反义带,从而证实了A78-3和A78-4两个亚系的反义ccr基因已经在愈伤组织和再生小植株中都得到了成功的整合和表达,而A78-5则没有表达.选择384个与木质素生物合成及植物生理代谢和环境适应性有关的基因或cDNA片段构建尼龙芯片膜,并对转基因细胞亚系A78-3、A78-4和A78-5和对照亚系A95∶88∶22等培养再生植株进行基因表达的微阵列检测.

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