嗜热菌Thermaerobacter subterraneun磷酸三酯酶在大肠杆菌BL21中的异源表达与性质表征

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有机磷农药因环境污染和食药残留问题严重威胁着人们的身心健康，这使有机磷农药降解酶的研发迫在眉睫。降解有机磷农药的主要酶类是磷酸三酯酶，因其成本低、快速解毒而引起人们的广泛关注，而来源于嗜热菌中的酶类以其稳定性好、活力高而备受青睐。本试验从嗜热菌Thermaerobacter subterranean BAA137中调取磷酸三酯酶基因（PTE），构建重组质粒pET-28a-PTE，经转化诱导在大肠杆菌 BL21 中高效表达。通过组氨酸镍柱分离纯化、SDS-PAGE 和 Western-blot鉴定，得到目标蛋白，并进行酶学性质表征。（1）对嗜热菌Thermaerobacter subterranean BAA137进行复壮培养，结果表明：2%接种量、60℃静置培养 24h 为嗜热菌最适生长条件，这极大缩短了嗜热菌的生长周期。（2）以嗜热菌 TS 基因为模板，PCR 扩增出磷酸三酯酶基因，构建重组质粒pET-28a（+），测序结果表明磷酸三酯酶基因克隆成功。（3）对重组酶进行性质表征，结果显示：重组磷酸三酯酶是别构酶，Vmax为101.81U/mg，Hill系数n为0.8，显示负协同效应;其最适温度是70℃，最适pH是8，半衰期是4h;金属离子对重组磷酸三酯酶的影响中，Ba2+、Ni2+和Mg2+随着离子浓度的增加酶活力随之降低，显示出明显的抑制作用。其中Co2+和Zn2+的激活作用最明显;大多数有机溶剂对重组磷酸三酯酶有激活作用（除丙三醇外），并且随着浓度的增加，酶活力也增高，其中二甲基亚砜的作用最明显。

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作者
全金香;
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作者单位

吉林农业大学;

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授予单位吉林农业大学;
学科食品加工与安全
授予学位硕士
导师姓名詹冬玲;
年度 2018
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原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类一般性问题;环境生物学;
关键词
嗜热菌; 磷酸三酯酶; 大肠杆菌; 异源表达;

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