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奶牛泌乳期乳汁中IgA的检测及消长规律

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第一章前言

1.1黏膜免疫及概述

1.2黏膜免疫及工gA的研究进展

1.3EL工SA检测方法的介绍

1.4研究的目的和意义

第二章正文

2.1材料与方法

2.2结果与分析

2.3讨论

第三章结论

参考文献

附表

致谢

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摘要

分泌型免疫球蛋白A(secretory immunoglobulin A,SIgA)是黏膜免疫最重要的执行者，是外分泌液中存在的一种最主要的抗体。SIgA在黏膜免疫中通过免疫清除、免疫屏障及中和作用等将病原微生物排出体外，达到保护机体的目的。分泌乳汁的乳腺因产生SIgA为主的抗体而作为整个黏膜免疫系统的一部分。乳汁中SlgA能特异性预防新生仔畜胃肠道感染。 本研究将牛初乳经10000r/min离心所得的乳清过葡聚糖G-200凝胶层析柱得IgA和IgG混合蛋白，再过纤维素DEAE-52柱纯化牛IgA，经SDS-PAGE电泳鉴定为单体IgA。免疫兔制备兔抗牛IgA抗体，然后用辣根过氧化酶标记，制备兔抗牛IgA酶标抗体。应用本研究建立双抗体夹心ELISA对吉林春光奶牛场和吉林农大南场具有代表性的样品进行检测，为深入研究黏膜免疫及与黏膜免疫有关的疾病提供一定依据。 采用鼠抗牛IgA血清粗提蛋白作为包被抗原，建立用于检测牛乳中IgA的双抗体夹心ELISA。双抗体夹心ELISA程序：鼠抗牛IgA抗体以包被液(碳酸盐缓冲液)稀释成最适包被浓度30ug/ml，分别吸取100μl，包被反应板置37℃温育3h后，再于4℃冰箱过夜，同时各板设初乳和酶标抗体对照。次日甩去包被液，以含0.05％Tween-20的0.01Mmol/LpH7.4.PBS(PBST)作为洗涤液，洗涤3次，每次3min(以下简称3×3 min洗涤)。将牛乳用稀释液二倍稀释，每孔加入100μl，37℃温育1h，3×3 min洗涤。将兔抗牛酶标抗体用0.05％BSA-PBST液稀释至工作浓度，每孔加入100μl，37℃温育1h，3×3 min洗涤。每孔加入新配制的底物(OPD)溶液100μl，37℃湿盒避光作用20min。每孔加2M H<,2>SO<,4>一滴终止反应，以DG-3022A型酶联免疫检测仪测定OD值(波长490nm)，判定结果。 先对吉林春光奶牛场的178头无乳房炎的奶牛分四个乳区进行采样，将采集的688份奶样应用本研究建立的双抗体夹心EIJSA检测方法进行检测，结果表明，同一头牛同一时期四个乳区IgA含量差异不显著。再对吉林春光奶牛场和吉林农大南场941头份样品进行检测，结果显示，奶牛泌乳期全程都有IgA抗体的存在，由双抗夹心ELISA OD值与IgA含量回归方程y=1.1985·x<'2.1819>(R<'2>=0.9927)得出奶牛产后1-3天(初乳)和70-190天所分泌的乳中IgA的含量显著高于其他时期。

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