NMDA受体在大鼠胎肺中的表达及对大鼠胎肺发育的影响

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目的:观察正常大鼠孕15天至孕21天胎肺中是否有NMDA受体的表达,并通过孕15天胎肺器官培养模型,观察NMDA受体激活对大鼠胎肺发育的影响及对调节胎肺发育有重要作用的TTF-1表达的影响。
　　方法
　　 1.孕鼠制备:200-250gSD雌性大鼠与300-350g雄鼠1:1合笼,次日晨见阴栓确定为孕0天(E0)。
　　 2.胎肺组织NMDAR mRNA测定:荧光定量PCR测定孕15天至21天胎肺NMDA1,NMDA2A,NMDA2B,NMDA2C,NMDA2D,NMDA3A,NMDA3B受体mRNA的表达。
　　 3.胎肺器官培养及分组:将胎肺置于transwell板的微孔膜上(直径:0.8um),使其处于气液交界处,采用含有青霉素(100U/mL),氯霉素(100ug/mL)的无血清BGJb培养基,37℃,5％CO2条件下培养。试验分组:对照组:培养基中不加任何处理。处理组:在培养基中添加NMDA(sigma公司),终浓度为1mmol/L。
　　 4.培养胎肺一般情况:每24hr胎肺大体面积变化,每48hr胎肺湿重,胎肺分支情况。
　　 5.胎肺病理学检查:上皮细胞分化情况,单位囊泡周径,单位囊泡面积,单位肺实质面积,单位囊泡面积与肺实质面积比。
　　 6.TIF-1 mRNA测定:荧光定量PCR测定对照组与处理组培养不同时间TTF-1 mRNA的表达量的变化。
　　 7.统计学分析:实验数据用均数±标准差表示,多组间比较用单因素方差分析(one-way ANOVA)及SNK-q检验,两组间比较用T检验。P＜0.05认为有统计学意义。
　　结果
　　 1.胎肺组织NMDAR表达:正常大鼠孕15天至孕21天胎肺组织存在NMDAR1,NMDAR2A,NMDAR2B,NMDAR2C,NMDAR2D,NMDAR3A,NMDAR3B表达。孕15天至孕17天胎肺以NMDAR3C表达为主,孕18天至孕20天以NMDAR2A表达为主,21天胎肺以NMDAR2D表达为主。
　　 2.胎肺培养情况:随着培养时间延长,胎肺湿重增加(p＜0.05),面积增大(p＜0.05),支气管分支越来越多,越分越细。
　　 3.培养胎肺HE染色:培养96hr内,随着培养时间的延长,肺上皮细胞由高柱状上皮细胞向立方上皮细胞分化,单位囊泡周径增大(p＜0.01),单位囊泡面积增大(p＜0.05),单位肺实质面积减小(p＜0.05),囊泡面积/肺实质面积比值增大(p＜0.05)。
　　 4.培养胎肺TTF-1 mRNA表达变化:随着培养时间延长,TTF-1mRNA表达量增加(p＜0.05)。
　　 5.NMDA对培养胎肺的影响:NMDA(1mmol/L)处理组培养胎肺肺单位囊泡周径减小(p＜0.05),单位囊泡面积减小(p＜0.01),单位肺实质面积增多(p＜0.01),囊泡面积与肺实质面积比降低(p＜0.01),但胎肺面积、胎肺湿重、TTF-1 mRNA的表达量与处理组比较无统计学差异(p＞0.05)。
　　结论
　　 1.成功建立了大鼠胎肺器官培养模型。
　　 2.首次观察了正常大鼠孕15天至孕21天胎肺组织存在NMDAR1,NMDAR2A,NMDAR2B,NMDAR2C,NMDAR2D,NMDAR3A,NMDAR3B mRNA的表达及其动态变化。
　　 3.首次发现NMDA受体的激活可抑制大鼠胎肺的发育,其抑制胎肺发育的分子机制与TTF-1 mRNA表达无关。

著录项

作者
廖正嫦;
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作者单位

中南大学;

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授予单位中南大学;
学科儿科学
授予学位硕士
导师姓名岳少杰;
年度 2011
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类化学药理学;
关键词
N-甲基-D-天冬氨酸; N-甲基-D-天冬氨酸受体; 胎肺发育; 甲状腺转录因子-1; NMDA受体;

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