促肾上腺皮质激素释放激素、核转录因子c-Fos/AP-1及间隙连接蛋白-43在分娩发动机制中的研究

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人类的分娩发动机制复杂，其动因尚不清楚，早产及过期产是增加围产儿病死率的重要原因。因此，对分娩发动这一生理过程及其机制的进一步研究是防治早产及过期产的关键。研究发现促肾上腺皮质激素释放激素(Corticotrophin-releas-ing hormone，CRH)在子宫收缩和分娩发动中起重要作用，认为可能是分娩发动的启动因子。但其具体机制目前还不清楚。间隙连接蛋白-43(Connexin-43，Cx43)在子宫平滑肌中表达增加是子宫收缩分娩发动的重要物质基础。细胞核转录因子激活蛋白-1(Activator-protein-1，AP-1)能与许多基因上的AP-1位点结合，参与调控靶基因转录。在Cx43基因的启动子区域有AP-1结合位点，AP-1可促进Cx43的转录和蛋白表达；已有研究表明，AP-1亚单位c-Fos在Cx43的表达中发挥重要调节作用。因此，我们设想从基因水平特异性的阻断子宫平滑肌细胞内AP-1的活性而竞争性抑制Cx43的表达，进而阻止分娩发动，为早产的防治提供新的思路。Decoy核酸技术作为一个新的基因治疗策略，可特异性的阻断核转录因子的活性而抑制下游基因的表达。为证实我们的设想，并为利用AP-1 decoy寡核苷酸(ODN)类药物防治早产提供理论依据和技术基础，本研究借助阳离子脂质体介导的基因转染技术，首次应用AP-1 decoy ODN竞争性地阻断子宫平滑肌细胞内AP-1的活性，进行了以下二个方面的研究。第一部分促肾上腺皮质激素释放激素、c-Fos及间隙连接蛋白-43在分娩发动中的相关性研究目的探讨促肾上腺皮质激素释放激素(Corticotrophin-releas-ing hormone，CRH)、c-Fos和间隙连接蛋白-43(Connexin-43,Cx43)在足月妊娠子宫平滑肌中的表达变化及它们在分娩发动中的相关性。方法；选择2006年2月～2006年9月在中南大学湘雅二医院住院足月临产产妇30例(in labor，L组)，足月未临产产妇30例(notin labor，NL组)，未孕妇女因宫颈内瘤样病变行子宫切除术患者30例(对照组in non-pregnant，NP组)。应用放射免疫方法测定三组妇女静脉血中CRH的含量；用核酸原位杂交技术和SP免疫组化法检测子宫平滑肌中c-Fos、Cx43 mRNA及蛋白的表达水平。结果；1)足月临产组母血CRH水平(371.79±54.13 pg/ml)高于足月未临产组(157.23±47.71 pg/ml)，P<0.05，足月未临产组高于对照组(5.68±3.18 pg/ml)，P<0.05。2)c-Fos mRNA及蛋白的阳性信号主要定位于子宫平滑肌细胞核内，少量位于细胞浆内；c-Fos在子宫平滑肌组织中的mRNA和蛋白表达的阳性指数：足月临产组(5.44±1.66，5.36±1.52)分别高于足月未临产组(4.14±0.88，3.86±0.90)及对照组(1.04±0.38，1.24±0.35)，各组间存在显著性差异，P<0.05。3)Cx43 mRNA及蛋白的阳性信号定位于子宫平滑肌细胞浆内；Cx43在子宫平滑肌组织中的mRNA和蛋白表达的阳性指数：足月临产组(5.48±1.43，5.58±1.28)分别高于足月未临产组(4.08±0.58，4.10±0.52)及对照组(1.54±0.64，1.14±0.59)，各组间存在显著性差异，P<0.05。4)母血中CRH水平分别与子宫平滑肌组织中c-Fos mRNA和蛋白的表达水平呈正相关(r<,1>=0.62，r<,2>=0.50)，P<0.05；与子宫平滑肌组织中Cx43mRNA和蛋白的表达水平呈正相关(r<,3>=0.52，r<,4>=0.68)，P<0.05；子宫平滑肌组织中c-FosmRNA和蛋白表达水平与Cx43mRNA和蛋白的表达水平呈正相关(r<,5>=0.51，r<,6>=0.60)，P<0.05a 结论；母血中CRH水平、子宫平滑肌中c-Fos和间隙连接蛋白Cx43的表达水平与分娩发动密切相关，且三者间表达变化呈正相关。第二部分促肾上腺素皮质激素释放激素通过核转录因子c-fos/AP-1促进人子宫平滑肌细胞间隙连接蛋白-43的表达目的探讨人类促肾上腺素皮质激素释放激素对子宫平滑肌中Cx43的调节作用和c-Fos/AP-1激活的信号传导途径。方法；原代培养人未孕子宫平滑肌细胞(从行子宫切除术的未孕患者获得)，给予不同浓度的CRH干预，瞬时转染AP-ldecoyoligodeoxynucleotide(ODN)以阻断Cx43上的AP-1结合位点；采用用免疫荧光检测Cx43蛋白表达，荧光素酶检测AP-1的活性，c-Fos和Cx43的mRNA和蛋白表达分别用real-time RT-PCR和Western blot检测。结果；在未孕子宫平滑肌细胞，CRH促进了Cx43的表达，激活了AP-1启动子的活性。CRH显著增强c-fos、Cx43 mRNA和蛋白表达(p<0.05)，且有剂量依赖趋势。转染足量的含有AP-1结合位点的AP-1decoy ODN后，不影响CRH对c-Fos表达的调控，却明显抑制了Cx43mRNA和蛋白的表达(p<0.05)。结论；在原代子宫平滑肌细胞中，CRH可以通过上调c-Fos/AP-1促进Cx43 mRNA和蛋白的表达。阻断Cx43的AP-1结合位点后，使CRH对Cx43表达的上调作用消失。

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作者
吴湘;
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作者单位

中南大学;

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授予单位中南大学;
学科妇产科学
授予学位硕士
导师姓名丁依玲;
年度 2007
页码
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原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类病因学;围产期医学;
关键词
促肾上腺素皮质激素释放激素; 核转录因子激活蛋白; 间隙连接蛋白; AP-1 decoy寡核苷酸; 人未孕原代子宫平滑肌细胞; 阳离子脂质体; 分娩发动机制; 早产; 过期妊娠;

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