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实验技术路线图
前言
第一章筛选代表小鼠植入前胚胎紧密化相关基因的ESTs
1材料和方法
1.1试剂
1.2主要仪器
1.3采集小鼠胚胎
1.4小鼠胚胎ds cDNA合成
1.5 SSH差异筛选
1.6抑制PCR(suppression PCR)扩增8-细胞紧密化胚胎差异表达的cDNA片段
1.7消减杂交效率的检测
1.8差异筛选片段的克隆和测序
1.9对测序片段进行生物信息学分析
2结果
2.1小鼠胚胎ds cDNA合成及纯化
2.2 SSH的结果
2.3差异筛选片段的克隆和测序
2.4序列分析
3讨论
第二章小鼠植入前胚胎紧密化相关基因Crg1的克隆及表达特征的研究
1材料和方法
1.1试剂和材料
1.2主要仪器
1.3小鼠胚胎采集
1.4各时期胚胎cDNA及低循环数cDNA的制备
1.5 EST序列拼接及Crg1 cDNA的序列分析
1.6 Crg1 cDNA的克隆
1.7序列同源性和功能区的生物信息学分析
1.8 Crg1基因在植入前胚胎中的表达研究
1.9 Crg1基因在小鼠胚胎干细胞和胚胎成纤维细胞中的表达检测
1.10 Crg1基因的组织表达谱研究
2结果
2.1各时期胚胎cDNA及低循环数cDNA合成的适当LD-PCR循环数确定
2.2 EST序列拼接及Crg1 cDNA的克隆
2.3基因序列和蛋白质结构生物信息学分析
2.4 Crg1基因在植入前各时期胚胎中的表达谱
2.5 Crg1基因在小鼠胚胎干细胞和胚胎成纤维细胞中的表达
2.6 Crg1基因在成年小鼠的8种组织中的表达
3讨论
第三章利用数字差异展示方法获得植入前胚胎发育过程中各个阶段的差异基因表达谱
1数据库和分析方法
1.1数据库
1.2分析方法
2结果
2.1各胚胎时期特异高表达差异表达基因数目的统计分析
2.2各胚胎时期差异表达基因的表达模式图
2.3各胚胎时期差异表达基因的表达模式图分解
2.4植入前胚胎各时期差异表达的EST族功能归类分析对数回归分析
3讨论
参考文献
小结
综述一：小鼠胚胎紧密化现象分子基础的研究进展
综述二：人类植入前胚胎中的基因表达研究
致谢
攻读学位期间主要的研究成果
