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【6h】

非洲爪蟾GATA-1b与GATA-1a差异位点突变后的功能研究

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目录

英文缩写注释

前言

实验流程图

材料与方法

结果

一、采用定点突变技术改造非洲爪蟾GATA-1b基因

1.突变位点的选择

2.质粒模板的转化、鉴定与准备

3.突变反应产物的检测

4.突变产物测序结果

5.突变率的测定

二、xGATA-1b突变体在非洲爪蟾体内的功能研究

1.外转录结果

2.体外翻译结果

3.GATA-1b突变后在非洲爪蟾神经发育中的作用

4.GATA-1b突变后在非洲爪蟾造血方面的作用

5.N-CAM和Tα-globin序列测定

讨论

一、突变方法的选择

二、突变体mRNA翻译能力分析

三、突变位点对于xGATA-1b发挥神经抑制功能的意义

结论

参考文献

综述

致谢

个人简历

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摘要

发育生物学是当前生物医学研究迅速发展的领域之一.进行发育生物学研究不仅可以展示调节生物体发育的分子机制,同时也有助于理解人类许多疾病特别是肿瘤发生的过程.造血系统是机体发育的重要组成部分,造血干细胞(HematopoieticStemCells,HSCS)增殖、分化为成熟红细胞、粒细胞、淋巴细胞一直是人们研究的热点之一.该课题将进行如下研究:(1)通过定点突变改造xGATA-1b基因;(2)利用爪蟾系统,研究突变后xGATA-1b在造血和神经发生方面可能的功能变化,探讨xGATA-1b与xGATA-1a之间功能差异的结构基础.该研究首次对非洲爪蟾GATA-1b中Ser168,His169,Thr304,Thr359四个位点进行了突变研究,并获得了3个GATA-1b的突变体.经动物帽形态观察和RT-PCR分析,发现了突变体G1bMl(S168,H169deletion)以及G1bM2(T304A,T359A)丧失抑制神经发生的功能,但不具有神经诱导作用;而G1bM3(T304A)仍保留了野生型xGATA-1b的神经抑制功能.三种突变均未影响xGATA-1b在造血方面的作用.

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