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第一部分引言
一研究背景
(一)肿瘤的转移
(二)黏附分子与肿瘤转移
(三)整合素与肿瘤转移
(四)肝素与肿瘤转移
二本研究的内容和意义
第二部分实验材料与方法
一实验材料
(一)细胞系与小鼠
(二)蛋白质和抗体
(三)试剂
(四)质粒
二实验方法
(一)细胞培养
(二)质粒的大量制备
(三)建立稳定表达整合素CHO细胞株
(四)免疫荧光检测
(五)建立稳定表达绿色荧光蛋白的GFP-A375和GFP-B16F10细胞株
(六)流式细胞仪检测细胞表面分子
(七)静止粘附实验
(八)肿瘤细胞的酶处理
(九)血小板的固定
(十)体外模拟毛细血管的层流实验
(十一)血小板和肿瘤细胞在体内三维体系相互作用实时观察的实验
第三部分实验结果与分析
一血小板整合素αⅡbβ3介导了A375细胞与血小板的相互作用
二稳定表达αⅡbβ3整合素的CHO细胞株的(GP-CHO)的建立
三在静止条件下A375细胞与GP-CHO细胞间的相互作用
四在静止粘附条件下对具有抑制粘附活性的化学修饰肝素的筛选
五化学修饰肝素抑制A375细胞在层流条件下与GP-CHO细胞的粘附
六固定的血小板支持A375细胞在层流条件下的细胞的粘附
七化学修饰肝素抑制A375细胞在层流条件下与血小板的粘附
八肿瘤细胞与血小板在体内肺部血管中的相互作用能够被肝素及肝素修饰物所抑制
第四部分讨论
一血小板整合素αⅡbβ3介导了A375细胞与血小板的相互作用及这种相互作用的特异性
二肿瘤细胞表面的硫酸乙酰肝素蛋白聚糖在肿瘤转移过程中的作用
三肝素修饰物抑制αⅡbβ3整合素介导的肿瘤细胞与血小板间相互作用的能机制
四化学修饰肝素在预防肿瘤转移临床实践中的应用
主要结论
主要创新点
参考文献
附 录
致 谢