人表皮生长因子（hEGF）在大肠杆菌中的表达及其多克隆抗体的制备

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1引言

1.1表皮生长因子(EGF)概述

1.1.1 EGF的结构与功能关系

1.1.2 EGF受体

1.1.3 EGF家族

1.1.4 EGF的生物学效应及应用

1.2多克隆抗体技术

1.2.1抗原和抗体

1.2.2多克隆抗体的制备

1.2.3多克隆抗体与单克隆抗体的比较

1.2.4多克隆抗体的应用

1.3选题依据及意义

2材料与方法

2.1实验材料

2.1.1动物材料

2.1.2质粒和菌种

2.1.3化学试剂

2.1.4 hEGF引物

2.2实验方法

2.2.1原核表达载体pGEX-2T-hEGF的构建

2.2.2 GST-hEGF融合蛋白在大肠杆菌中的诱导表达

2.2.3 GST-hEGF融合蛋白抗体的制备及抗体效价的检测

3结果

3.1目的基因hEGF的人工合成

3.2重组质粒pGEM-T-hEGF的构建

3.3重组质粒pGEM-T-hEGF的鉴定

3.4原核表达质粒pGEX-2T-hEGF的构建

3.5原核表达质粒pGEX-2T-hEGF的鉴定

3.6 GST-hEGF融合蛋白在大肠杆菌中的诱导表达

3.6.1 IPTG诱导蛋白的表达

3.6.2利用SDS-PAGE聚丙烯凝胶电泳确定GST及GST-hEGF融合蛋白相对分子量

3.7 GST-hEGF融合蛋白抗体的制备及抗体检测

3.7.1 BALB/c小鼠的免疫免疫效果

3.7.2 GST-hEGF融合蛋白抗体效价的Western-blot检测

4讨论

4.1原核表达质粒pGEX-2T-hEGF的构建

4.2利用SDS-PAGE聚丙烯凝胶电泳制备GST-hEGF融合蛋白的多克隆抗体

4.3 GST-hEGF融合蛋白抗体的检测

5结论

参考文献

致 谢