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人胃癌生长激素受体(GHR)差异表达细胞株与重组人生长激素(rhGH)促增殖效应变化

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摘要

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前言

文献综述 重组人生长激素的临床应用及恶性肿瘤相关安全性研究进展

第一章 材料与方法

1.1 材料及仪器

1.1.1 实验动物

1.1.2 主要试剂

1.1.3 主要仪器

1.1.4 细胞株

1.1.5 质粒及菌株

1.1.6 PCR引物

1.2 实验方法

1.2.1 试剂配制

1.2.2 细胞培养

1.2.3 GHR干扰片段的设计及重组质粒的连接

1.2.4 重组质粒的提取和纯化

1.2.5 重组质粒的转染以及稳定细胞系的筛选

1.2.6 RT-PCR检测稳定转染的细胞系GHR表达

1.2.7 Western blot检测检测稳定转染的细胞系GHR表达

1.2.8 动物模型的建立

1.2.9 实验分组与观察指标

1.2.10 免疫组化检测胃癌组织中VEGF蛋白表达

1.2.11 Western Blot法检测JAK2/STAT3通路关键蛋白的表达

1.3 统计学处理

第二章 实验结果

2.1 亲本及转染后各组细胞株GHR蛋白表达量

2.2 肿瘤体积和裸鼠体质量变化

2.3 肿瘤组织VEGF蛋白定性表达

2.4 肿瘤组织JAK2/STAT3蛋白表达检测

第三章 讨论

结论

参考文献

致谢

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在读期间发表文章

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摘要

[目的]运用小分子干扰RNA(siRNA)技术获取生长激素受体(GHR)基因差异表达的人胃癌MGC803细胞株,探讨rhGH干预GHR不同表达状态细胞株植入裸鼠体内的移植瘤生长情况及JAK2/STAT3通路关键节点基因表达变化。
  [方法] Western-blot法鉴定亲本及转染后细胞株GHR表达状态,72只接种皮下移植瘤的裸鼠随机分为:对照组(生理盐水0.2 mL/d),低剂量rhGH组[1 U/(kg·d)]和高剂量rhGH组[3U/(kg·d)],连续给药21d,观察并记录裸鼠体质量和肿瘤体积,免疫组织化学法检测胃癌组织中VEGF蛋白表达,Western Blot法测JAK2-STAT3通路节点蛋白变化。
  [结果]转染空载体细胞株GHR蛋白表达量与亲本细胞株差异不明显(P>0.05),转染干扰载体株较亲本细胞株GHR蛋白下降57%。对于接种亲本及空载质粒转染的人胃癌细胞株MGC803的裸鼠,rhGH给药组皮下移植瘤体积较对照组增大(P<0.05),且H组促增长效应显著(P<0.05),3组间体重差异不明显(P>0.05);VEGF蛋白表达较对照组升高,JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3含量增加;对于GHR表达下调的人胃癌细胞株MGC803的裸鼠,给药组体重大于对照组(P<0.05),而3组之间肿瘤体积大小、VEGF蛋白表达水平及JAK2/STAT3通路重要节点蛋白含量比较差异均无统计学意义(P>0.05)。
  [结论] rhGH能促进GHR阳性表达的MGC803移植瘤生长,但对经siRNA技术抑制GHR基因表达的MGC803移植瘤未表现出促肿瘤生长效应,其机制可能与血清VEGF分泌及JAK2-STAT3信号转导通路节点基因功效有关。

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