炭疽杆菌假想S-层蛋白slp基因的功能研究

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论文说明：缩略表

声明

1 绪论

1.1 炭疽芽胞杆菌及其致病作用

1.1.1 病原学

1.1.2 流行病学

1.1.3 致病机制

1.2 S-层蛋白

1.2.1 S-层蛋白质的结构

1.2.2 S-层的功能

1.2.3 S-层的应用前景

1.3 本研究的目的和意义

2 材料和方法

2.1 菌株、质粒和供试材料

2.2 仪器设备与主要试剂

2.2.1 主要仪器

2.2.2 主要试剂及其它耗材

2.3 培养基及试剂配制

2.3.1 培养基及相关试剂配制

2.3.2 其它溶液的配制

2.4 炭疽芽胞杆菌SLP缺失突变体的构建

2.4.1 引物合成与DNA测序

2.4.2 重组质粒的构建及突变体的鉴定

2.5. 突变体和野生株生理生化特征测定

2.5.1 突变体和野生株生长曲线的测定

2.5.2 突变体和野生株生化生化特性测定

2.6 野生株和突变株的毒力评价

2.6.1 A16R和A16R△slp芽胞的获取

2.6.2 A16R和A16R△slp芽胞毒力评价的细胞实验

2.6.3 A16R和A16R△slp毒力评价的动物实验

2.7 突变体和野生株的比较蛋白质学研究

2.7.1 炭疽杆菌A16R和A16R△slp全菌蛋白的样品制备

2.7.2 双向电泳

2.7.3 图像扫描与分析

2.7.4 胶内酶切

2.7.5 酶解肽段混合物的MALDI-TOF质谱检测

2.7.6 ESI-MS/MS鉴定蛋白质

2.7.7 数据库查询

3 结果与讨论

3.1 缺失突变体A16R△slp构建的过程验证

3.1.1 重组质粒pKSV7-S的构建

3.1.2 重组质粒pKSV7-US的构建

3.1.3 打靶载体pKSV7-USD构建

3.1.4 缺失突变体A16R△slp的PCR鉴定

3.1.5 假想S-层蛋白SLP的缺失鉴定

3.2 突变体和野生株生长状态的测定

3.3 突变体和野生株部分生化特性比较结果

3.4 A16R和A16R△slp芽胞镜检结果

3.5 A16R和A16R△slp芽胞与CHO细胞的相互作用

3.6 A16R和A16R△slp繁殖体的毒力评价的动物实验

3.7 野生株和突变体的比较蛋白质组学研究

3.7.1 A16R和SLP缺失突变体宽pH梯度蛋白表达图谱

3.7.2 野生株A16R和突变株A16R△slp不同时相双向电泳

3.7.3 差异蛋白的质谱查询结果

3.7.4 相关蛋白图谱的结果分析

4 结论与展望

4.1 结论

4.2 展望

致谢

参考文献

附录