氧化葡萄糖酸杆菌木糖醇脱氢酶和D-阿拉伯糖醇脱氢酶基因的克隆与协同表达

声明

摘要

第一章 绪论

1．1 木糖醇的概述

1．1．1 木糖醇的应用

1．1．2 木糖醇的生产方法

1．2 木糖醇的生物转化途径

1．2．1 多菌多步转化葡萄糖生成木糖醇

1．2．2 两菌两步转化葡萄糖生成木糖醇

1．3 木糖醇生物转化途径中的关键酶

1．3．1 D-阿拉伯糖醇脱氢酶(ArDH)

1．3．2 木糖醇脱氢酶(XDH)

1．4 课题研究的目的与意义

1．5 主要研究内容

1．6 技术路线

第二章 氧化葡萄糖酸杆菌木糖醇脱氢酶基因的克隆表达及酶学性质研究

2．1 引言

2．2 材料

2．2．1 菌株和质粒

2．2．2 培养基

2．2．3 主要酶和试剂

2．2．4 仪器设备

2．3 基本实验方法和步骤

2．3．1 菌体的培养

2．3．2 分子克隆技术

2．3．3 重组菌SDS-PAGE分析

2．3．4 重组酶的纯化

2．3．5 XDH活力的测定

2．3．6 XDH酶学性质测定

2．4 结果与讨论

2．4．1 重组质粒pSE-xdh的构建

2．4．2 氧化葡萄糖酸杆菌XDH基因的序列分析

2．4．3 xdh基因表达产物的蛋白质电泳分析

2．4．4 XDH的纯化及比活力测定

2．4．5 XDH的酶学性质

2．5 本章小结

第三章 氧化葡萄糖酸杆菌D-阿拉伯糖醇脱氢酶基因的克隆表达及酶学性质研究

3．1 引言

3．2 材料

3．2．1 菌株与质粒

3．2．2 培养基

3．2．3 主要酶和试剂

3．2．4 仪器设备

3．3 基本实验方法和步骤

3．3．1 菌体的培养

3．3．2 分子克隆技术

3．3．3 重组菌SDS-PAGE分析

3．3．4 重组酶的纯化

3．3．5 ArDH活力的测定

3．3．6 ArDH酶学性质测定

3．4 结果与讨论

3．4．1 重组质粒pSE-ardh的构建

3．4．2 氧化葡萄糖酸杆菌ArDH基因的序列分析

3．4．3 ardh基因表达产物的蛋白质电泳分析

3．4．4 重组酶的纯化及比活力测定

3．4．5 ArDH的酶学性质

3．5 本章小结

第四章 木糖醇脱氢酶和D-阿拉伯糖醇脱氢酶基因的协同表达及转化

4．1 引言

4．2 材料

4．2．1 菌株

4．2．2 培养基

4．2．3 主要酶和试剂

4．2．4 仪器设备

4．3 基本实验方法和步骤

4．3．1 菌体的培养

4．3．2 分子克隆技术

4．3．3 重组菌SDS-PAGE分析

4．3．4 木糖醇脱氢酶和D-阿拉伯糖醇脱氢酶的活力测定

4．3．5 种子液制备

4．3．6 摇瓶发酵

4．3．7 木糖醇含量测定方法

4．4 结果与讨论

4．4．1 重组质粒pSE-xdh-ardh的构建

4．4．2 xdh和ardh基因协同表达产物的蛋白质电泳分析

4．4．3 发酵验证

4．4．4 产物的气相色谱分析

4．5 本章小结

第五章 全文总结与展望

5．1 主要结论

5．2 展望

参考文献

致谢

在学期间发表的学术论文及其他科研成果

附录