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第一章 绪论
1.1 手足口病
1.1.1 手足口病简介
1.1.2 手足口病流行现状
1.1.3 手足口病病原学
1.1.4 手足口病的鉴别诊断和检测方法
1.2 肠道病毒71型
1.2.1 肠道病毒71型的简介
1.2.2 肠道病毒71型的分子流行病学
1.2.3 病毒的感染与复制
1.2.4 肠道病毒71型的致病性和嗜神经性
1.3 microRNA
1.3.1 microRNA简介
1.3.2 病毒microRNA与细胞microRNA
1.3.3 肠道病毒71型与microRNA
1.4 本研究的目的和立题依据
1.5 研究内容
第二章 用病原和肠道病毒71型检测方法的建立
2.1 材料和方法
2.1.1 材料
2.1.2 方法
2.2 结果
2.2.1 RNA标准品的制备和定量
2.2.2 标准曲线的绘制
2.2.3 多重荧光RT-PCR方法的建立
2.2.4 多重荧光RT-PCR方法的特异性、灵敏度、重复性
2.2.5 多重荧光RT-PCR的临床检测和验证
2.3 讨论
第三章 镇江市2009-2010年手足口病的流行病学调查
3.1 材料与方法
3.1.1 流行病学资料
3.1.2 其他资料的来源
3.1.3 卫生部发布的《手足口病预防控制指南》规定的手足口病病例诊断
3.1.4 统计与分析方法
3.2 结果
3.2.1 镇江市手足口病的疫情情况
3.2.2 镇江市手足口病的流行病学特点
3.2.6 镇江市手足口病的病原学
3.2.7 镇江市重症手足口病的分析
3.3 讨论
第四章 江苏省肠道病毒71型分子流行病学调查
4.1 材料和方法
4.1.1 材料
4.1.2 方法
4.2 结果
4.2.1 样品EV71/EV-U双重荧光定量RT-PCR检测结果
4.2.2 EV71vp1基因扩增结果
4.2.3 EV71基因进化树分析
4.3 讨论
第五章 肠道病毒71型感染神经细胞后microRNA的变化
5.1 材料与方法
5.1.1 材料
5.1.2 方法
5.2 结果
5.2.1 EV71病毒分离和鉴定
5.2.2 EV71病毒滴度(TCID50)检测
5.2.3 EV71病毒感染人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞
5.2.4 总RNA的提取
5.2.5 EV71病毒感染SK-N-SH细胞前后miRNA芯片杂交
5.2.6 EV71病毒感染SK-N-SH细胞前后miRNA芯片结果
5.3 讨论
第六章 实时荧光定量PCR验证基因芯片结果
6.1 材料与方法
6.1.1 主要试剂
6.1.2 主要仪器
6.1.3 方法
6.2 结果
6.2.1 总RNA的提取
6.2.2 实时荧光定量PCR的结果
6.2.3 实时荧光定量PCR与芯片结果的比较
6.3 讨论
第七章 miRNA对肠道病毒71型的调控
7.1 材料与方法
7.1.1 材料
7.1.2 方法
7.2 结果
7.2.1 miRNA模拟体和抑制体转染SK-N-SH细胞
7.2.2 SK-N-SH细胞病变效应比较
7.2.3 miRNA对EV71VP1蛋白表达的影响
7.2.4 miRNA对EV71病毒滴度(TCID50)的影响
7.2.5 miRNA对EV71RNA的影响
7.2.6 qRT-PCR验证转染后miRNA含量变化
7.2.7 利用生物学软件预测miRNA的靶基因
7.3 讨论
第八章 主要结论及展望
8.1 主要结论
8.2 创新点
8.3 展望
参考文献
在读期间已发表和待发表的论文
致谢
