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第一章 文献综述
1.1 蓝细菌PCC6803概况
1.1.1 蓝细菌简介
1.1.2 蓝细菌PCC6803的生理、生化特征
1.1.3 蓝细菌基因图的制定
1.1.4 蓝细菌全基因组测序
1.1.5 蓝细菌的遗传系统
1.1.6 蓝细菌PCC6803的遗传操作系统
1.2 细菌细胞的程序性死亡和“毒素-抗毒素系统”
1.2.1 细胞程序性死亡(programmed cell death,PCD)
1.2.2 细菌细胞的程序性死亡
1.2.3 细菌细胞程序性死亡的机制
1.2.4 细菌“毒素-抗毒素系统”
1.3 蓝细菌PCC6803基因组中的“毒素-抗毒素系统
1.4 本项研究的目的和内容
第二章 蓝细菌PCC6803染色体上毒素-抗毒素基因在大肠杆菌中的克隆和鉴定
2.1 材料和方法:
2.1.1 菌株及培养条件
2.1.2 分子生物学操作方法
2.1.3 PCC6803染色体的提取方法
2.1.4 PCR反应体系的建立
2.1.5 毒素或抗毒素-毒素基因诱导表达及细胞活性分析
2.2 结果
2.2.1 PCC6803染色体上毒素-抗毒素系统基因序列分析
2.2.2 双诱导调控启动子质粒的构建
2.2.3 PCC6803染色体上毒素基因的扩增、克隆、鉴定
2.2.4 含毒素基因重组质粒中克隆片段E.coliBL21DE3的诱导表达
2.2.5 PCC6803染色体上抗毒素基因的扩增、克隆、鉴定
2.2.6 含毒素和抗毒素基因重组质粒中克隆片段在E.coli BL21DE3的诱导表达24
2.2.7 毒素-抗毒素基因诱导表达对细菌生长的影响
2.3. 讨论:
第三章 ssl2920-ssl2921,ssr1114-slr0664,ssr3532-slr2080在蓝细菌PCC6803中的毒性-抗毒性作用
3.1 材料和方法
3.1.1 菌株及培养条件
3.1.2 实验方法:
3.1.3 PCC6803的转化
3.1.4 诱导表达突变株诱导方法及表型分析
3.2 结果:
3.2.1 诱导slr0664和ssr1114-slr0664共表达重组质粒的构建
3.2.2 诱导slr2080表达和ssr3532-slr2080共表达重组质粒的构建
3.2.3 诱导ssl2921表达和ssl2920-ssl2921共表达重组质粒的构建
3.2.4 铜离子诱导表达突变株构建
3.2.5 铜离子诱导表达突变株细胞活性分析
3.3 讨论:
第四章ssl2920/ssl2921,ssr1114/ slr0664,ssr3532-slr2080缺失突变株和表达调控突变株构建
4.1 材料和方法:
4.1.1 菌株及培养条件
4.1.2 实验方法:
4.2 结果
4.2.1 ssr1114-slr0664基因的缺失突变重组质粒的构建
4.2.2 ssl2920-ssl2921基因的缺失突变重组质粒的构建
4.2.3 ssr3532-slr2080基因的缺失突变重组质粒的构建
4.2.4 缺失突变株的构建
4.2.5 毒素-抗毒素系统基因表达调控质粒的构建
4.2.6 毒素-抗毒素系统基因表达调控突变株的构建
4.3 讨论:
第五章 主要结论与展望
5.1 主要结论
5.2 研究展望
参考文献
附录1 缩略语表
附录2 主要实验仪器
附录3 主要试剂及配制
致谢