上海地区海产品中副溶血弧菌的分离鉴定、分子分型及tdh基因的克隆表达

声明

摘要

第一章 副溶血弧菌的研究概述

1 副溶血弧菌的生物学特性

1．1 菌名与分类地位

1．2 形态大小

1．3 生长栖息环境和培养特性

1．4 生化特性与鉴定方法

2 副溶血弧菌的致病性与主要毒力因子

2．1 致病性

2．2 副溶血弧菌的主要毒力因子

第二章 副溶血弧菌的检测与分型方法

1 副溶血弧菌的检测方法

1．1 国家标准方法(National Standard Method)

1．2 血清学检测(Serological Test)

1．3 聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction，PCR)

1．4 核酸杂交法(Nucleic Acid Hybridization)

2 副溶血弧菌分子分型技术的现状研究

2．1 依赖PCR方法的分子分型技术

2．2 不依赖PCR技术的分子分型技术

2．3 小结

第三章 上海地区副溶血弧菌分离鉴定与毒力基因检测

1 材料与方法

1．1 材料

1．2 主要试剂

1．3 主要仪器

1．4 细菌的分离和培养

1．5 细菌的鉴定与检测

1．6 细菌gyrB看家基因测序

1．7 毒力因子检测

2 结果

2．1 细菌分离与鉴定

2．2 副溶血弧菌的PCR鉴定

2．3 gyrB基因测序

2．4 gyrB氨基酸序列比对

2．5 副溶血弧菌毒力基因的PCR检测

2．6 神奈川溶血现象

2．7 副溶血弧菌对小鼠半数致死量(LD50)的测定

3 讨论

第四章 副溶血弧菌ERIC-PCR分子分型研究

1 材料与方法

1．1 菌株

1．2 主要试剂及仪器

1．3 DNA的提取

1．4 ERIC-PCR

2 结果

2．1 ERIC-PCR产物电泳

2．2 ERIC-PCR分型

3 讨论

第五章 副溶血弧菌耐热直接溶血素tdh基因的克隆表达与抗原性分析

1 材料与方法

1．1 菌株、质粒和感受态细胞

1．2 实验动物

1．3 试验试剂

1．4 试验仪器及设备

1．5 引物设计与合成

2 方法

2．1 PCR扩增目的基因

2．2 目的基因亚克隆

2．3 表达质粒构建与鉴定

2．4 表达载体诱导表达

2．5 包涵体蛋白的复性

2．6 重组蛋白TDH多克隆抗体的制备

2．7 副溶血弧菌tdh基因表达产物ELISA测定效价

2．8 Western Blotting分析融合蛋白的抗原性

3 结果

3．1 tdh基因的PCR扩增与克隆

3．2 测序结果及同源性分析

3．3 目的基因在大肠杆菌中的表达、纯化和鉴定

3．4 ELISA测定表达产物免疫效价

4 讨论

参考文献

全文总结

致谢