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健脾益肺口服液对慢阻肺“肺脾气虚证”大鼠免疫功能及气道炎症的影响

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摘要

[目的]：
　　 探明健脾益肺口服液对慢性阻塞性肺疾病稳定期大鼠免疫功能、气道炎症的影响，求证健脾益肺口服液是否通过NF-κB信号传导途径来调节慢阻肺大鼠免疫功能及抑制其气道炎症，为健脾益肺口服液临床治疗慢阻肺病人提供实验依据，从而进一步论证将“健脾益肺法”作为慢阻肺稳定期中医药治疗手段的可行性和重要性；深入理解“肺脾气虚”这一慢阻肺稳定期中医证型和客观指标“免疫功能低下”及“气道炎症指标”等的相关性，加深对慢阻肺稳定期肺脾气虚证本质的认识，促进中医证型客观化，对指导中医药治疗慢阻肺稳定期的基础研究具有重要意义。
　　 [方法]：
　　 1．理论探讨方面：对慢阻肺中医病机进行深入探讨；深入分析健脾益肺法治疗慢阻肺的依据；探析健脾益肺口服液的方义，分析其用于调节慢阻肺免疫功能、抑制气道炎症的可行性。
　　 2．实验研究方面：将65只SD成年雄性大鼠随机分为6组，空白对照组10只、其余各组每组11只，分别为模型组、健脾益肺口服液高、中、低剂量组及地塞米松阳性药对照组；用香烟烟熏加脂多糖复合因素复制慢阻肺“肺气虚证”动物模型，然后用大黄煎液灌胃复制“脾气虚证”模型：造模28天结束，在14天开始按照实验设计给药，28天后测定指标；观察各组大鼠整体情况、HE染色后观察各组基本病理变化：MASSON染色后观察各组胶原含量、平滑肌厚度等；应用图像分析系统测定支气管平滑肌厚度、气管内径等，计算支气管平滑肌指数、胶原纤维面积；取动脉血，抗凝后用动脉血气分析仪测定大鼠PaCO2、PaO2、PH及SaO2等动脉血气指标；取血后剥离大鼠胸腺、脾脏，根据体质量计算大鼠胸腺指数、脾脏指数；麻醉后取血，抗凝后用流式细胞仪测定血液中CD3+、CD4+、CD8+的表达率，并计算CD4+/CD8+比值；部分血液离心后取血清，用ELISA试剂盒测定IgG、IgA、IgM水平及IL-8、TNF-α活性；取大鼠肺部组织，液氮速冻研磨用trizol提取组织mRNA，逆转录后，设计引物进行real-timePCR扩增，以内参为对照，观察各组肺组织IL-8、TNF-αmRNA的基因表达；肺部组织用试剂盒提取组织蛋白质，利用蛋白印迹(WB，Westernblotting)方法，测定各组肺组织NF-κB和I-κB的表达。
　　 [结果]：
　　 1．通过对动物模型的整体观察及肺组织病理学结果，证实了慢阻肺“肺脾气虚证”动物模型的复制是成功的，从而为实验的顺利进行提供了依据；
　　 2．健脾益肺口服液能显著改善慢阻肺实验大鼠的整体情况，如咳嗽、体重、精神状态等；
　　 3．健脾益肺口服液能显著抑制大鼠气道炎症，降低胶原含量、胶原纤维面积、支气管平滑肌指数，改善气道重塑，作用类似于或优于地塞米松，以高、中剂量组为佳；
　　 4．健脾益肺口服液能改善大鼠缺氧状态，由此提高大鼠的存活率，改善生存质量，但对PCO2、PH无明显改善作用；
　　 5．健脾益肺口服液能显著提高慢阻肺大鼠细胞及体液免疫功能，降低其急性发作次数；
　　 6．健脾益肺口服液能抑制IL-8、TNF-α炎性标志物的浓度及IL-8、TNF-αmRNA在肺组织的表达，疗效以高、中剂量组为佳；
　　 7．健脾益肺口服可增加慢阻肺大鼠体质量、胸腺指数、脾脏指数，提高机体免疫力，增强防病抗病能力；
　　 8．健脾益肺口服液可降低NF-κB在肺组织的表达，提高了I-κB的表达。而NF-κB信号传导途径在慢阻肺气道炎症反应、免疫调节中起着重要作用，本实验健脾益肺口服液提高了免疫功能、抑制了气道炎症，同时下调NF-KB在肺组织的表达，上调I-κB的表达，故推测健脾益肺口服液可能通过NF-κB信号传导途径调节COPD免疫功能、抑制气道炎症。
　　 [结论]：
　　 1．肺脾气虚直接关系到慢阻肺的发生、发展，为慢阻肺稳定期的病机关键。从“肺脾气虚证”的病机出发，立法健脾益肺，通过健脾而达到补益肺气的目的。
　　 2．健脾益肺口服液能增强慢阻肺实验大鼠免疫功能、抑制其气道炎症，改善气道重塑，且一般以高、中剂量组为佳，对部分指标的疗效呈剂量依赖性；其机制可能为通过NF-κB信号传导途径抑制慢阻肺大鼠气道炎症、调控其免疫功能；并有可能通过下调炎症因子调节慢阻肺免疫功能。
　　 3．慢阻肺“肺脾气虚证”病证结合动物模型的成功复制使研究更有针对性，在中医基础研究与临床研究之间架起了桥梁，有助于中医药作用机制的研究，且对于深层次探讨中西医理论的内在联系有重要意义。
　　 4．本研究加深了对慢阻肺稳定期“肺脾气虚证”本质的认识，在促进中医药疗效机制的阐明及中药新药的研发中具有重要意义，为探索出中医药治疗慢阻肺的优势环节、作用靶点提供了依据。

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