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GPR50在自闭症谱系障碍中的病理作用和机制研究

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前言

材料与方法

1.实验材料

1.1实验动物

1.2原代神经元

1.3主要试剂

1.4实验仪器

1.5主要试剂配方

2.实验方法

2.1 动物的繁殖与基因鉴定

2.2 行为学实验

2.3 神经元的分离和培养

2.4 活性氧检测

2.5 高尔基染色实验

2.6 组织免疫荧光染色

2.7 Western blot检测蛋白的表达

3. 统计方法

实验结果

1. GPR50敲除小鼠表现出自闭症样行为

1.1 GPR50敲除鼠有更多的重复性动作和刻板行为

1.2 GPR50敲除小鼠焦虑程度更低

1.3 GPR50敲除小鼠有一定的社交障碍

1.4 GPR50敲除小鼠有明显的学习记忆障碍

2 形态学实验结果

2.1 GPR50在海马和皮层神经元上有丰富的表达

2.2 GPR50对神经前体细胞增殖和分化的影响

2.3 GPR50对树突棘的影响

2.4 GPR50保护细胞免受氧化应激的损伤

讨论

结论

参考文献

综述:自闭症的研究进展及GPR50在自闭症中的作用

中英文缩略词对照表

致谢

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摘要

自闭症谱系障碍(AutismSpectrum Disorder,ASD)是一种具有社交行为障碍、语言发展障碍,并伴有重复性或刻板性行为的神经发育疾病。
  G蛋白偶联受体50(GPR50)是X-染色体相关的孤蛋白受体,褪黑激素相关受体(melatonin related receptor),主要分布在成年哺乳动物脑内的垂体、下丘脑、海马等部位。相关研究已表明GPR50和双极情感障碍、抑郁症以及精神分裂症等神经系统疾病有关;值得注意的是,GPR50基因在ASD患者体内有两个突变位点:Δ502–505和T532A,并且这种突变只发生在男性个体上。但目前GPR50在大脑中的功能尚不清楚。
  我们的研究发现,GPR50敲除小鼠(G-/Y)表现出明显的重复性刻板行为、社交障碍、学习记忆障碍等自闭症样行为;与同窝野生型小鼠(G+/Y)比较,G-/Y小鼠海马区神经前体细胞的增殖和星形胶质细胞的数量明显增加,而CA1区神经元的数量、DG区树突棘的密度明显减少;另外,我们观察到G-/Y小鼠神经元的凋亡和活性氧水平(reactive oxygen species,ROS)明显增高,并伴随着线粒体蛋白的表达水平增加,暗示GPR50敲除导致线粒体功能障碍。因此,本论文发现GPR50可能通过维持线粒体功能参与神经发育如神经前体细胞的增殖、神经元的成熟和凋亡等过程。GPR50敲除或功能缺失会导致上述神经发育过程异常,从而导致小鼠表现出自闭症样行为

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