miRNA-30c靶向抑制cxcr4a和调控胚胎中内胚层器官形成

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目的:
　　探讨miR-30c在调控细胞分化中的作用及对脊椎动物早期胚胎发育的影响。
　　方法:
　　1、生物信息学分析:1）从miRBase数据库(http://www.mirbase.org/)中获取各物种miR-30家族成员的核苷酸序列，并用软件Clustal W进行多序列比对。2）以miR-30家族成员各自原始转录本(pri-miR-30)核苷酸序列为基础的种系树由软件MEGA5中邻接法(neighbor-joiningmethod)计算建立。
　　2、TaqMan PCR技术和胚胎整体原位杂交技术:斑马鱼基因组DNA抽提，PCR和探针质粒构建，地高辛标记反义RNA探针准备，胚胎整体原位杂交，基于TaqMan PCR技术的miRNA表达分析。
　　3、显微注射miR-30c-duplex、显微注射吗啡啉（morpholino）环标记的反义寡核苷酸:分别将morpholino（吗啡啉修饰反义寡核苷酸链morpholino,dre-miR-30c-MO）、duplex(miR-30c-duplex)和mRNA(体外转录合成的egfp-cxcr4a-3'UTR mRNA、egfp-cxcr4a-3'UTR(miR-30cmut)mRNA)经显微注射进入胚胎细胞并设对照组。
　　4、进行miRNA靶基因预测分析并和全胚胎miRNA靶基因报道系统比对。
　　结果:
　　1、miR-30c母源性低表达，原肠后期至体节中期呈广泛表达且中内胚层表达丰富，受精后24小时特异性表达于胚胎原肾管。
　　2、过表达miR-30c斑马鱼胚胎表现为中内胚层细胞向胚胎中线迁移能力下降，最终呈现双心畸形和内脏畸形。
　　3、特异性抑制miR-30c的成熟，可增强斑马鱼胚胎中内胚层细胞向中线迁移的能力。
　　4、细胞迁移相关因子cxcr4a是miR-30c的潜在靶基因之一。
　　结论:
　　1、初步探讨miR-30c在胚胎发生早期的时空表达模式。
　　2、miR-30c是中内胚层细胞向中线迁移和器官形成的重要调控因子。
　　3、通过上调Cxcr4a蛋白的信号强度可保障胚胎的正常发育。

著录项

作者
毛琳;
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作者单位

苏州大学;

展开▼
授予单位苏州大学;
学科临床儿科
授予学位硕士
导师姓名吴良霞;
年度 2015
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类 Q959.304;
关键词
脊椎动物; 胚胎发育; 细胞分化; 微小核糖核酸-30c;

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