多形汉逊酵母突变株的构建

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前言

第一章多形汉逊酵母遗传、生理性状研究

1.1多形汉逊酵母生理及遗传研究

1.1.1甲醇在多形汉逊酵母中的代谢

1.1.2硝酸盐的同化

1.1.3多形汉逊酵母(Hansenu1a Polymorpha CBS4732)基因组测序与分析

1.1.4过氧化物酶体

1.1.5多形汉逊酵母外源蛋白质的表达

第二章多形汉逊酵母菌种选育的研究

2.1采用诱变选育优良多形汉逊酵母的研究

2.2杂交育种

2.3原生质体融合法育种

2.4遗传工程技术育种

第三章材料与方法

3.1实验材料

3.1.1实验菌株及质粒

3.1.2培养基

3.1.3缓冲液与试剂

3.2实验方法

3.2.1菌株诱变

3.2.2突变株富集

3.2.3营养缺陷型突变株筛选鉴定

3.2.4突变株生物量的测定

3.2.5突变株遗传稳定性的测定

3.2.6酵母总DNA的提取

3.2.7染色体DNA浓度的测定

3.2.8MOX基因PCR扩增

3.2.9 MOX扩增产物的处理

3.2.10大肠杆菌质粒DNA的提取

3.2.11质粒的限制性酶切及连接转化

3.2.12大肠杆菌感受态细胞的制备及转化

3.2.13酵母完整细胞转化法

第四章结果与讨论

4.1 DES诱变初筛结果

4.1.1 ura缺陷型突变株筛选结果

4.1.2 ade缺陷型突变株筛选结果

4.1.3 leu缺陷型突变株筛选结果

4.1.4 ura，ade，leu缺陷型突变株照片

4.1.5 ura，ade，leu缺陷型突变株生物量

4.1.6 ura，ade，leu缺陷型突变株的遗传稳定性

4.2 MOX基因的扩增

4.2.1 MOX基因全序列

4.2.2 MOX引物设计

4.2.3 PCR反应条件

4.2.4 MOX扩增片段电泳

4.3 pHAM-1重组质粒的构建

4.3.1pHAM-1重组质粒的构建过程

4.3.2 pHAM-1重组质粒的电泳照片

4.4阳性转化子的筛选

第五章结论

参考文献

致谢