钙、磷对体外培养SD大鼠成骨细胞增殖、分化及矿化影响的研究

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本试验选用5d SD大鼠头盖骨作为试验用OB的来源，通过胰蛋白酶预消化后，剪碎，经II型胶原酶消化获得细胞，采用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)、钙化结节染色鉴定，经台盼蓝染色、“反复贴壁法”纯化后，进行了成活率和纯度分析，用MTT法检测了一个生长周期内OB的活性分布，成功建立了SD大鼠头盖骨OB体外培养模型；在体外培养的基础上，在培养液中添加不同浓度的钙、磷及其比例，共分9组，分别为不添加任何成分的对照组、添加1、2、4 mmol/L钙组、添加1、2、4 mmol/L磷组、钙磷比1:2(添加1 mmol/L钙+2 mmol/L磷)组和钙磷比2:1(添加2 mmol/L钙+1 mmol/L磷)组。分别从OB的形态学、OB分泌ALP活性、OB分泌蛋白、I型胶原(collagen type I，Col-I))、骨桥蛋白(osteopontin，OPN)的含量、OB表达ALP、Col-I、OPN、骨钙素(bone glaprotein，BGP) mRNA的含量及OB内Ca2+沉积及体外钙化等指标进行了分析，详细的研究了钙、磷及其比例对乳鼠头盖骨OB增殖、分化及矿化的影响。结果表明，①本试验培养的头盖骨OB，经ALP染色鉴定，并计数，OB纯度高达98.06％，台盼蓝染色计数分析，原代OB成活率为88.69％，传代的OB成活率高达94.12％，且在一个生长周期内，在第3、4d进入对数生长期，细胞融合并开始重叠生长，在第7d达到峰值，并进入钙化期，随后细胞进入衰减期。因此，本试验将选择在细胞融合时定为钙、磷处理OB的时间点，检测处理后第2、5、8d的各种指标；②与对照组比较，添加钙各组均促进OB增殖，且有剂量效应，钙4 mmol/L从第2d开始差异显著(P<0.05)，钙1、2 mmol/L从第Sd开始差异显著(P<0.05)，而钙磷比(2:1、1:2)只在第8d差异显著(P<0.05)。而添加磷对QB增殖作用影响不明显。③与对照组比较，添加钙使OB胞体饱满，表面针状突起增多，形态结构无破损，细胞膜、核膜完整，线粒体轻度肿胀，添加磷及不同钙磷比使OB胞体扁平，针状突起减少，但形态结构无破损，细胞膜、核膜完整。④与对照组比较，添加钙、磷及其比例在第2、5、8d均抑制细胞内ALP活性(P<0.05)，在第5 d抑制其mRNA的表达(P<0.01)，但在第2、8 d却促进其mRNA的表达(P<0.05)。⑤与对照组比较，添加钙、磷及其比例各试验组除1 mmol/L钙外，在第2d均促进Col-I分泌(P<0.01)，钙各组和1 mmol/L磷在第5d和钙各组和1、2 mmol/L磷和钙磷比(2:1)在第8 d均抑制其分泌(P<0.05或P<0.01)，在第2、8d均促进其mRNA表达(P<0.01)，在第5 d除钙磷比(1:2)外均抑制其mRNA表达(P<0.01)。⑥与对照组比较，添加钙、磷及其比例作用后，各试验组均促进OPN mRNA的表达(P<0.01)，除第2 d钙1、2mmol/L组外，均促进其分泌(P<0.05)。⑦与对照组比较，添加钙、磷及其比例作用后，各试验组均促进BGP mRNA的表达(P<0.01)。⑧与对照组比较，添加钙、磷及其比例作用后，各试验组均能促进OB内Ca2+的沉积及体外钙化。表明，钙(1、2、4 mmol/L)及钙磷比(1:2，2:1)能促进OB增殖、分化及体外钙化，利于新骨的形成。磷(1、2、4 mmol/L)能促进OB的分化及体外钙化，但对增殖作用不明显。

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作者
卓丽玲;
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作者单位

扬州大学;

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授予单位扬州大学;
学科临床兽医学
授予学位博士
导师姓名刘宗平;
年度 2009
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原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类动物学实验（实验动物学）、动物学技术;内分泌腺疾病及代谢病;
关键词
骨细胞增殖; 钙; 磷; 骨代谢疾病; 骨质疏松症; I型胶原; 骨钙素; 骨桥蛋白;

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