• 主题
高级搜索  >
历史搜索 清空历史
首页> 中文学位 >下调UBC9增加肝癌细胞对阿霉素的敏感性
【6h】

下调UBC9增加肝癌细胞对阿霉素的敏感性

代理获取
页面导航
  • 目录
  • 摘要
  • 著录项
  • 相似文献
  • 相关主题

目录

声明

中英文缩略词表

第1章 引言

第2章 材料与方法

2.1 材料

2.1.1 细胞株

2.1.2 主要试剂试剂名称

2.1.3 主要仪器设备

2.1.4 自配试剂

2.2 方法

2.2.1 UBC9在人肝癌组织中的表达

2.2.2 UBC9在肝癌细胞株中的表达

2.2.3 qRT-PCR及Western Blot 检测转染后UBC9mRNA及蛋白的表达

2.2.4 CCK8检测各组细胞的增殖水平

2.2.5 流式细胞仪检测各组细胞的凋亡情况

2.2.6 统计学方法分析

第3章 实验结果

3.1 Western Blot检测UBC9在肝癌组织及癌旁组织中的表达

3.2 免疫组化检测UBC9在肝癌组织及癌旁组织的表达

3.3 UBC9的表达与患者临床病理特征之间的关系

3.4 UBC9在人肝癌细胞株及正常肝细胞中的表达

3.5 转染UBC9-shRNA后HepG2细胞中UBC9在mRNA及蛋白水平都下调

3.6 shRNA UBC9联合阿霉素对 HepG2细胞增殖的影响

3.7 shRNA UBC9联合阿霉素对HepG2细胞凋亡的作用

第4章 讨论

第5章 结论

致谢

参考文献

攻读学位期间的研究成果

综述:针对UBC9的癌症治疗

展开▼

摘要

目的：
　　检测泛素缀合酶9(ubiquitin conjugating enzymes9，UBC9)在肝癌组织中的表达，探讨其在癌和癌旁组织中的表达差异和患者临床病理参数之间的关系，并研究通过shRNA下调 UBC9后肝癌细胞HepG2对阿霉素的敏感性的改变及其可能存在的机制。
　　方法:
　　1.采用蛋白印迹法（Western Blot）及免疫组织化学染色法检测肝癌患者术后标本癌与癌旁组织中UBC9的表达，并分析其表达与临床病理参数的关系。
　　2.采用 Western Blot技术检测人肝癌细胞株 HepG2、Huh7、Hep3B、SMMC-7721、 LM3及正常肝细胞LO2中UBC9的表达。
　　3.设计及合成针对UBC9基因的干扰序列，短发夹RNA（UBC9-shRNA),利用脂质体进行瞬间转染人肝癌细胞株HepG2。用qRT-PCR及Western Blot技术检测各组细胞中UBC9mRNA及蛋白表达水平的变化，筛选出下调最明显的shRNA进行下面的实验。下面的实验我们在转染后的细胞内加或者不加入阿霉素，把细胞分为Normal细胞组, shNC细胞组，shUBC9-a细胞组，DOX组， shNC+DOX细胞组，shUBC9-a+DOX细胞组。
　　4.采用CCK8检测转染后的各组细胞对阿霉素的半对数抑制浓度（IC50)及不同药物浓度对各组细胞的抑制率。
　　5.采用Annexin V-FITC/PI染色流式细胞仪检测各组细胞的凋亡情况。
　　研究结果：
　　1.免疫组织化学结果显示，UBC9在肝癌组织中主要表达于细胞质内，在肝癌组织的阳性表达率为69.92％(72/103)，相对于癌旁组织；而癌旁组织阳性率为17.47%（18/103),相对于癌组织，配对t检验及独立样本t检验结果显示差异有统计学意义(P＜0.001)。
　　2.Western Blot检测结果也显示肝癌组织中UBC9的表达高于癌旁组织，其结果与免疫组化的结果类似。
　　3.采用卡方检验分析UBC9与肝癌的临床病理特征间的关系。结果显示：UBC9蛋白表达与肿瘤有无包膜(P=0.001)、肿瘤大小(P=0.001)和肝内卫星灶(P＜0．001)等临床病理特征有显著相关性。UBC9蛋白在肝癌组织中的表达水平与性别(P=0.239、年龄(P=0.095)、有无乙肝病毒感染(P=0.216)、肝硬化(P=0．576)等无关(P＞0．05)。
　　3.人肝癌细胞株HepG2、Huh7、Hep3B、SMMC-7721、LM3中UBC9蛋白表达水平较人肝细胞株LO2明显高（P＜0.05);而肝癌细胞株中HepG2细胞表达最高，所以我们从中选出肝癌细胞株HepG2完成接下来的细胞实验。
　　4.干扰质粒UBC9-shRNA能明显下调UBC9的表达，用荧光显微镜下观察GFP表达情况，约70-80%的细胞发出绿色荧光，感染效率高；qRT-PCR及Western Blot检测结果显示干扰质粒UBC9-shRNA均能能有效的下调UBC9 mRNA及蛋白水平。
　　5.CCK8检测结果发现目的组IC50明显减小，相对于空载组，差异具有统计学意义(P＜0.05)。而空载组及正常细胞组无明显差异(P＞0.05)。
　　6.流式细胞仪检测发现，下调UBC9的表达后，细胞凋亡率明显增加，相对于空载组；而加入阿霉素后，细胞凋亡率增加，相对于正常细胞组；而在干扰组中加入阿霉素后细胞凋亡增加最明显，相对于其他各组加入或者不加入阿霉素，差异具有统计学意义(P＜0.05)。
　　结论：
　　1.本实验通过免疫组化及Western Blot检测肝癌及癌旁组织发现，UBC9在肝癌组织中表达明显高于癌旁组织
　　2.UBC9蛋白表达与肿瘤大小，肝内转移灶及肿瘤有无包膜等临床病理特征有显著相关性。
　　3.下调UBC9可以抑制肝癌细胞HepG2的增殖，促进其凋亡,增加其对阿霉素的敏感性。所以UBC9可能作为针对的肝癌的治疗的靶点。

著录项

  • 作者

    方素芬;

  • 作者单位

    南昌大学;

    南昌大学医学院;

  • 授予单位 南昌大学;南昌大学医学院;
  • 学科 内科学(消化系病)
  • 授予学位 硕士
  • 导师姓名 郭武华;
  • 年度 2017
  • 页码
  • 总页数
  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 中文
  • 中图分类 肝肿瘤;
  • 关键词

    肝癌; 泛素缀合酶9; 阿霉素; 细胞凋亡;

相似文献

  • 中文文献
  • 外文文献
  • 专利
代理获取

客服邮箱：kefu@zhangqiaokeyan.com

京公网安备：11010802029741号 ICP备案号：京ICP备15016152号-6 六维联合信息科技 (北京) 有限公司©版权所有

  • 客服微信

  • 服务号