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【6h】

EGCG预处理在心肌细胞缺氧/复氧损伤中的保护作用及其细胞内PI3-K/Akt信号通路的研究

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论文说明：英文缩写及全文和中文对照表

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第1章 引言

第2章 材料与方法

2.1 主要材料及试剂

2.1.1实验动物

2.1.2主要试剂和产地

2.2主要仪器设备和产地

2.3 实验方法

2.3.1心肌细胞的分离培养

2.1.2心肌细胞缺氧/复氧损伤模型的建立

2.1.3实验分组

2.1.4观察指标及方法

2.4统计学分析

第3章 结果

3.1 培养心肌细胞的一般特性

3.2各处理组心肌细胞存活率

3.3各处理组心肌细胞培养液中LDH的活性

3.4各处理组心肌细胞的凋亡水平

3.5各处理组心肌细胞中t-Akt和p-Akt蛋白的表达

第4章讨论

第5章结论

致 谢

参考文献

综 述 ：PI3K-Akt信号转导通路与心肌缺血再灌注损伤

攻读学位期间的研究发展

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摘要

目的：以原代培养的SD新生乳鼠心肌细胞为研究对象，建立心肌细胞缺氧/复氧损伤模型，在细胞水平模拟心肌缺血再灌注损伤，探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin-3-gallate，EGCG）预处理对心肌细胞缺氧/复氧（Anoxia/Reoxygenation，A/R）损伤的保护作用及其与细胞内PI3K-Akt信号转导通路的关系。 方法：实验用SD新生大鼠（1～3d），雌雄不拘，无菌取出乳鼠心脏，经分离附着组织，胰蛋白酶消化，纯化制成心肌细胞，在培养48h后随机分为4组：正常对照（Control）组、缺氧/复氧（A/R）组、EGCG预处理组（EGCG+A/R组）、EGCG+LY294002+A/R组。对以下指标进行检测：①细胞存活率（MTT法）；②培养液中LDH活性；③流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率；④Western blot法检测心肌细胞内t-Akt和p-Akt蛋白含量的表达。 结果：①细胞存活率：A/R组（45.79±3.98％）与Control组（93.62±3.01％）、EGCG+A/R组（73.86±4.78％）相比，有显著性差异（均p<0.01）；EGCG+LY294002+A/R组（49.62±4.83％）与A/R组相比，无显著性差异（p>0.05），但与EGCG+A/R组相比有显著性差异（p<0.01）。②培养液中LDH活性：A/R组（31.96±3.12U/L）与Control组（4.06±0.51U/L）比较，有显著差异（p<0.01）；EGCG+A/R组（17.46±1.91U/L）与A/R组比较，有显著性差异（p<0.01）；EGCG+LY294002+A/R组（29.52±2.62U/L）与A/R组相比，无显著性差异（p>0.05）；但与EGCG+A/R组相比有显著性差异（p<0.01）。③心肌细胞凋亡率：与Control组（5.24±0.86％）、EGCG+A/R组（9.68±1.12％）相比，A/R组（19.32±1.54％）心肌细胞凋亡程度明显增加，有显著性差异（均p<0.01）；EGCG+LY294002+A/R组（17.62±1.48％）与A/R组相比，无显著性差异（p>0.05），与EGCG+A/R组相比有显著性差异（p<0.01）。④心肌细胞内t-Akt及p-Akt表达含量的变化：各处理组心肌细胞内t-Akt蛋白的表达无显著性差异（均p>0.05）。p-Akt蛋白的表达在EGCG+A/R组中较A/R组显著增加，两者相比有显著性差异（p<0.01）；EGCG+LY294002+A/R组心肌细胞内p-Akt蛋白的表达较EGCG+A/R组则明显降低，两者有显著性差异（p<0.01）。 结论：从细胞水平证明了EGCG预处理对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤具有保护作用，这种预适应保护作用可能与EGCG激活了细胞内PI3K-Akt信号转导通路有关。

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