摘要:目的:探讨培养成人大隐静脉内皮细胞的有效方法.方法:采用胶原酶Ⅱ(0.2%)消化法收集大隐静脉内皮细胞,原代培养高密度种植(1.5×104/cm2),传代培养低密度种植(0.8×104/cm2),自体血清(10%~20%)培养,胰酶(0.25%)-EDTA(1 mmol·L-1)消化,1:3传代.结果:原代培养细胞,12~24 h贴壁70%~80%,2~3 d开始生长、延伸,(12.0±2.3)d细胞90%汇合,原代培养获取细胞数7.0×104/cm2.传代培养细胞,0.5~2.0 h贴壁80%~90%,3~5 h开始生长,(7.0±1.1) d长满瓶壁.传代细胞较原代细胞易于贴壁,生长旺盛.形态学可见细胞呈扁平状单层排列,梭形或多角形,典型的呈"铺路石"状改变;CD31相关抗原免疫荧光染色标记可见内皮细胞呈特异性黄绿色荧光;超微结构观察可见细胞表面有微绒毛,细胞浆内特异性的长杆状Weibel-Palade(WP)小体.结论:该方法确实、有效,为组织工程内皮细胞的研究和应用提供了新的途径.