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人参皂甙Rg3联合IRESSA对人A431细胞生长的抑制作用

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目的：人参皂甙Rg3是从红参中提取的中药单体，具有抑制多种肿瘤生长和转移等作用。表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)属于ErbB家族成员，是一种重要的跨膜受体。EGFR与配体结合后激活细胞内信号转导，参与细胞的增殖、迁移、黏附、分化和凋亡等过程。IRESSA是一种EGFR的小分子酪氨酸激酶抑制剂，临床上用于非小细胞肺癌等恶性肿瘤的晚期治疗。根据文献报道，在肿瘤的治疗中，单纯用药的模式已经不能满足临床需要，化疗药物的联合应用是最近治疗的热点，具有应用前景。本实验采用高表达EGFR的人表皮鳞状细胞癌细胞A431为研究对象，观察Rg3与IRESSA联合应用对A431细胞生长的抑制作用，并初步探讨其作用机制。
　　 方法：体外培养人A431细胞。将实验分为4组（对照组，Rg3处理组，IRESSA处理组和联合用药组）。MTT法检测药物对细胞增殖的影响；分析药物对细胞增殖的抑制率；用倒置显微镜对药物处理后第四天的细胞进行形态学观察；用WesternBlot的方法检测细胞核增殖抗原(PCNA)的表达；用RT-PCR检测FUT4的表达，用Western Blot的方法检测p-EGFR的表达。
　　 结果：
　　 1.MTT法检测细胞的增殖。处理方法为对照组（加入等量培养基），Rg3组(40μg/ml)，IRESSA组（0.025μ，ol/l），联合用药组Rg3(40μg/ml)和IRESSA(0.025μmol/l)。联合用药组细胞的增殖速率明显小于其他组，24小时后Rg3组抑制率为20.92％，IRESSA组抑制率为23.47%，联合用药组抑制率为35.71%;48小时后Rg3组抑制率25.00%，IRESSA组抑制率为32.98%，联合用药组抑制率为44.37%;72小时后Rg3组抑制率为42.10%，IRESSA组抑制率为48.58%，联合用药组抑制率为55.48%;96小时后Rg3组抑制率为57.55%，IRESSA组抑制率为65.86%，联合用药组抑制率为70.52%。联合用药组的抑制率高于单用其中任何一种药物组(p＜0.05)。
　　 2．用倒置显微镜对药物处理后第四天的细胞进行形态学观察。对照组A431细胞贴壁良好，饱满，呈不规则多边形，有棱角；Rg3组则细胞略微变圆，细胞与细胞的间隙缩小；IRESSA组可见部分细胞凋亡，细胞萎缩；联合用药组则有大量细胞死亡，可见部分细胞残片。
　　 3.Western Blot方法检测PCNA的表达。处理方法为对照组（加入等量培养基），Rg3组(320μg/ml)，IRESSA组（1μmol/l联合用药组Rg3（320μg/ml）和IRESSA(1μmol/l)。单纯用药组和联合用药组PCNA的表达均下降，联合用药组下降的程度更高（p＜0.05）。
　　 4．RT-PCR检测FUT4基因的表达（处理方法同PCNA的检测）。A431细胞的FUT4表达下降，联合用药组下降的程度更高(p＜0.05)。
　　 5.Western Blot检测p-EGFR的表达（处理方法同PCNA的检测）。单纯用药组和联合用药组p-EGFR的表达下降，联合用药组下降的程度更高(p＜0.05）。结论：人参皂甙Rg3和IRESSA均能抑制细胞的增殖，二者联合应用则可增加对肿瘤细胞生长的抑制作用，提示二者有协同作用。人参皂甙Rg3和IRESSA均能下调EGFR的激活，下调FUT4的表达有关。其机制有待于进一步研究。

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