中国林蛙皮肤膜活性多肽temporin-1CEa对三种乳腺癌细胞的作用研究

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膜活性多肽(membrane-active peptides)是一种广泛存在于生物体中的一类小分子生物活性肽，通常比较短，具有两亲性结构，带有正电，具有较好的抗菌活性和抗癌活性。其中具有抗癌作用的膜活性多肽可以选择性地作用于癌细胞，对正常细胞损伤较小，对人体几乎不具有毒性作用，且不易产生耐药性，因此有望发展成为新型的抗癌药物。两栖类动物膜活性多肽一般均为疏水的、带正电荷的并且以一种两亲性的α-螺旋的构象存在，这种结构可以促进与膜的相互作用能力，通过对癌细胞膜、细胞骨架、线粒体、细胞核等结构的入侵达到抗癌的作用效果。
　　本实验研究的膜活性多肽temporin-1CEa是从中国林蛙皮肤分泌物中提取获得的，由17个氨基酸组成，其中含有9个疏水性氨基酸和7个亲水性氨基酸，具有较好的两亲性；CD光谱结果显示，temporin-1CEa在水溶液中呈无规则结构，在50％TFE溶液中208和220nm处出现双负吸收峰，经计算其α-螺旋含量为87.59%，表明temporin-1CEa在脂膜中能形成α-螺旋构象；MTT法检测实验表明temporin-1CEa对人乳腺癌MCF-7、Bcap-37、MDA-MB-231细胞具有较好的抑制作用，在60min时已发挥明显的抗癌活性，与药物作用浓度呈正相关但与作用时间几乎没有相关性，溶血实验结果显示，temporin-1CEa在有效抑癌浓度范围内对人红细胞未见明显的溶血作用。
　　分别采用扫描电子显微镜和透射电子显微镜对temporin-1CEa作用于三种乳腺癌细胞后形态学的变化进行观察，结果显示随着temporin-1CEa浓度的增加，乳腺癌细胞表面出现不同程度的凹陷，细胞膜微绒毛减少，同时出现不同程度的破损。
　　通过激光扫描共聚焦显微镜观察FITC标记的temporin-1CEa在细胞中的作用部位，结果显示从5min到60min之间，随着时间的延长，temporin-1CEa从细胞膜逐渐进入到细胞内部，并且随浓度增加绿色荧光强度增强，说明temporin-1CEa首先在乳腺癌细胞膜部位吸附聚集破坏膜结构，然后进入细胞内发挥作用，最终导致细胞死亡。

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作者
田丽丽;
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作者单位

辽宁师范大学;

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授予单位辽宁师范大学;
学科细胞生物学
授予学位硕士
导师姓名尚德静,王澈;
年度 2012
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原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类乳腺肿瘤;肿瘤治疗学;
关键词
膜活性多肽; 乳腺肿瘤; 细胞膜; 形态结构; 作用靶点;

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