Aβ3-10短肽疫苗早期主动免疫APP/PS1双转基因小鼠体内抗体形成及对脑内Aβ沉积的研究

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目的：
　　阿尔茨海默病(Alzheimer's disease，AD)是临床上最常见的引起痴呆的疾病，近期记忆损害为其主要的临床表现。AD主要的病理特征是细胞外β淀粉样斑块（β-amyloid plaques，Aβ斑）沉积和细胞内神经元纤维缠结。传统的Aβ瀑布学说认为Aβ斑的毒性作用位于发病机制的核心，Aβ斑的存在诱导了细胞内微管相关tau蛋白的过度磷酸化、神经元纤维缠结、突触损害，最终导致AD的发生。
　　对Solanezumab的Ⅲ期临床试验数据进行二次分析显示，轻度认知障碍的患者(AD前轻度认知功能障碍)从Solanezumab的被动免疫治疗中获益，表现为认知功能障碍下降的延缓，提示预防性免疫的重要性。本实验选用幼年APP/PS1双转基因小鼠，在小鼠脑内还没有Aβ沉积的情况下，使用我们构建的新型针对Aβ3-10位点的多肽疫苗对小鼠进行预防性免疫，比较我们构建的新型疫苗与传统的Aβ1-42肽疫苗刺激体内抗体形成的水平，并探讨主动免疫对Aβ沉积的影响。
　　方法：
　　人工合成连接血蓝蛋白(Keyhole limpet hemocyanin，KLH)的Aβ3-10肽段作为实验组的免疫肽段，以Aβ1-42肽作为对照组1的免疫肽段，以PBS作为对照组2。将Aβ3-10-KLH、Aβ1-42分别配成浓度为2mg/ml的溶液，将其分别与弗氏佐剂（第一次注射为弗氏完全佐剂，以后每次注射为弗氏不完全佐剂）等体积混合，配成浓度为1 mg/ml的溶液，取100ul（即100ug/100ul／只）小鼠皮下注射。前两次免疫的时间间隔为2周，以后每次免疫的时间间隔为4周。在免疫前及每次免疫后10天采血提取血清。利用PH=3.5的酸性条件使Aβ和抗体解离后，根据Aβ和抗体的分子量不同，使用超滤离心管将Aβ和抗体分离，再使用传统的ELISA方法检测免疫前及每次免疫后血清中总抗体浓度。使用免疫组化的方法检测小鼠脑内Aβ斑的沉积情况。
　　结果：
　　使用我们合成的新型多肽疫苗Aβ3-10-KLH和传统的全长Aβ1-42疫苗免疫APP/PS1小鼠均可成功刺激小鼠产生抗Aβ抗体，且抗体的水平随免疫次数的增加而逐渐增高。将KLH与Aβ3-10耦联后，可增强Aβ3-10短肽的免疫原性，刺激小鼠在早期产生高水平的抗体，至末次免疫后，Aβ3-10-KLH刺激小鼠产生的抗体平均水平比传统的全长Aβ1-42肽高，但两者之间差异不具有统计学意义。小鼠脑片免疫组化染色显示，与PBS组相比，Aβ3-10-KLH组、Aβ1-42组脑内Aβ斑的沉积量明显减少，差异具有统计学意义(P＜0.05)，其中Aβ3-10-KLH组的沉积量比Aβ1-42组更低。
　　结论：
　　1、Aβ3-10-KLH可以成功刺激APP/PS1小鼠产生高浓度的抗Aβ抗体。
　　2、KLH可明显增强Aβ3-10短肽的免疫原性。
　　3、Aβ3-10-KLH免疫小鼠可明显减少脑内Aβ斑沉积，效果优于Aβ1-42。

著录项

作者
尹文超;
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作者单位

中国医科大学;

展开▼
授予单位中国医科大学;
学科临床医学；神经病学
授予学位硕士
导师姓名曹云鹏;
年度 2016
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类 R749.160.3;
关键词
阿尔茨海默病; β淀粉样沉积; 多肽疫苗; 预防性免疫;

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