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铜绿假单胞菌生物被膜的建立及其产生β-内酰胺酶活性的检测

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铜绿假单纯胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)是难治性肺部感染的常见条件致病菌.近年研究证明该菌极易形成生物被膜(Biofilm,BF).BF是指细菌粘附于生物材料或机体腔道表面时,分泌多糖基质、纤维蛋白、脂蛋白等,将自身包绕其中形成的膜样物.细胞细菌形成BF后,可逃避机体的免疫系统和抗菌物的杀灭作用.常规剂量的抗生素治疗常无效,使感染变为迁延、难治.目前BF菌的耐药问题已引起人们的广泛关注.该实验通过改良平板培养法建立铜绿假单胞单体外BF模型,分析铜绿假单胞菌的浮游细菌(Planktonic bacteria)、BF菌(Biofilm bacteria)及亚胺培南诱导BF菌产生β-内酰胺酶的能力,并比较三者产β-内酰胺酶活性的不同.研究BF铜绿假单胞菌的耐药机制,为临床治疗BF铜绿假单胞菌引起的难治性感染提供理论依据.结论:(1)用改良平板培养法建立的体外铜绿假单胞菌BF模型有效、简便、重复性好.(2)银染法鉴定铜绿假单胞菌BF可靠、特异、高效、省时、简便.(3)SEM可直接观察BF的形态结构,细菌形态及细菌细胞间的连接也清楚可辨,可很好地用于BF形态学方面的鉴定.(4)BF中铜绿假单胞菌产生β-内酰胺酶的活性明显高于浮游菌组,前者是后者的8.27倍,亚胺培南诱导的BF中,铜绿假单胞菌产生β-内酰胺酶的活性高于浮游菌组,是浮游菌组的12倍,也高于未被诱导的BF中铜绿假单胞菌产β-内酰胺酶的活性,是其1.45倍,说明BF铜绿假单胞菌的耐药性与β-内酰胺酶的产生有重要关系.

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