青岛和广州鼻咽癌组织中EBV核抗原2基因多态性的比较和分析

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目的：EB病毒(Epstein-Barr virus, EBV)属疱疹病毒科γ亚科成员，与多种人类肿瘤的发生密切相关，如Burkit’s淋巴瘤(Burkitt’s lymphoma, BL)、何杰金病(Hodgkin’s disease, HD)、鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma, NPC)、乳腺癌以及胃癌(gastric carcinoma, GC)等。有研究表明有超过90%成人感染过EBV，但EBV相关肿瘤的分布则具有明显的地域性和人群倾向性，除环境因素和遗传因素外，是否存在与EBV相关肿瘤有关的EBV基因变异一直是倍受关注的热点问题。本研究选择青岛和广州地区EBV阳性鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma, NPC)组织作为研究对象，对EBV核抗原(EBV nuclear antigen, EBNA)2编码基因的多态性进行检测和分析，旨在探讨EBV基因多态性及其在EBV阳性NPC发生中的意义。
　　方法：①聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)结合DNA测序检测EBV阳性NPC标本中EBNA2基因的多态性，应用DNAStar5.0软件中MegAlign对序列进行对比分析，并与EBV标准株B95-8序列进行比较。②根据测序结果，将其序列标准化处理后，应用DNAStar5.0软件生成系统树。③根据各基因出现的共有突变结合系统发生树对各基因变异进行分类，初步分析基因变异对相关基因功能的影响。④测序结果与我们前期对青岛地区EBV阳性鼻咽癌的检测结果进行比较。
　　结果：本研究广州地区32例EBV阳性NPC及39例TW标本EBNA2基因扩增及测序成功，根据系统发生树中EBNA2的变异模式以及以往EBNA2基因多态性的研究结果，鉴定归纳出E2-A，E2-C和B95-8样3种亚型。
　　①E2-A为最常见的亚型(38/71,52.1%)，NPC1为其代表株，该亚型有5个共有突变，包括2个错义突变 aa476(Glu→Gly/Trp)和 aa486(Ile→Thr)，3个同义突变 aa370(cct→cca)，aa417(acg→aca)和aa470(tca→tct)。有6个其它散在的突变，分别为aa331(Pro→Leu)，aa383(cct→cca)，aa390(ggt→gga)，aa411(Val→Ile)，aa438(Ile→Leu)和aa484(Pro→His)。
　　②E2-C为次要亚型(NPC3为代表株)，该亚型存在1处共有突变(aa370, cct→cca)和2个aa缺失(aa357和358)，有3处散在的突变分别为aa378(Ger→Tyr)，aa411(Val→Ile)和aa451(Pro→His)。值得注意的是，我们发现E2-C亚型与 GD1株序列高度一致，而GD1一直作为我国南方地区 NPC的代表毒株。
　　③ B95-8样亚型为最少见一类亚型(代表株为TA56)，仅有aa370一个位点的变异(cct→cca)。
　　④统计学分析结果显示，NPC和健康人群TWs中3种EBNA2亚型的分布有明显差异(P＜0.01)，NPC中E2-A亚型所占比例(71.9%,22/32)明显高于TW(38.5%,15/39)，TW中B95-8样亚型所占比例(25.6%,10/39)明显高于NPC(0%,0/32)。
　　结论：①E2-A亚型是中国南北方地区的优势流行株。
　　②EBNA2各亚型在NPC和TW中分布差异明显，提示E2-A亚型与NPC的发生密切相关，而B95-8样亚型在健康人群中更为常见。
　　③E2-A亚型在广州和青岛地区NPC组织中均高频出现，但广州地区NPC组织中E2-A亚型的出现频率远高于青岛地区，提示EBNA2基因变异具有肿瘤特异性而非仅仅地域性变异。

著录项

作者
张超;
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作者单位

青岛大学;

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授予单位青岛大学;
学科病原生物学
授予学位硕士
导师姓名罗兵;
年度 2016
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类咽肿瘤;
关键词
鼻咽癌; 核抗原2; 基因多态性; 肿瘤特异性;

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