符号说明
第一章 文献综述
1.1槐糖脂的概述
1.1.1槐糖脂的结构与性质
1.1.2槐糖脂的产生菌
1.1.3槐糖脂的合成
1.1.4槐糖脂的应用
1.2氧气对槐糖脂发酵生产的影响
1.3透明颤菌血红蛋白的研究进展
1.3.1透明颤菌血红蛋白的简介
1.3.2 VHb的结构与氧结合特性
1.3.3 VHb的脂质结合特性
1.3.4与伴侣蛋白的结合特性
1.3.5 VHb的蛋白质工程
1.3.6关于透明颤菌血红蛋白的应用
1.4研究内容及意义
第二章 vgb基因密码子的优化及重组菌的构建与表达
2.1实验材料
2.1.2实验仪器
2.1.3实验试剂及药品
2.1.4培养基及实验所需试剂的配制
2.2实验方法
2.2.1 vgb基因密码子优化
2.2.2 基因准备
2.2.3重组质粒pMD-18s rDNA的构建
2.2.4重组质粒pMD-18s rDNA-hpt的构建
2.2.5整合型表达载体pSBEX-hpt的构建
2.2.7 S. bombicola感受态细胞的制备
2.2.8重组表达质粒的线性化
2.2.9球拟假丝酵母的电转化
2.2.10转化子筛选
2.2.11 vgb基因验证
2.2.12 VHb蛋白表达验证
2.3实验结果
2.3.1 vgb基因密码子优化结果
2.3.2重组质粒pMD-18s rDNA验证
2.3.3 PGK启动子和HPT的克隆及重叠延伸
2.3.4质粒pMD-18s rDNA-hpt阳性克隆的验证
2.3.5整合型表达载体pSBEX-hpt验证
2.3.6含VHb表达载体pSBEX-hpt-vgb验证
2.3.7 VHb表达载体转入酵母
2.3.8转化子的复筛
2.3.9 VHb基因验证
2.3.10 VHb蛋白活性验证
2.4本章小结
第三章 vgb基因对槐糖脂发酵生产的影响及其机理研究
3.1实验材料
3.1.1实验菌种
3.1.2实验仪器
3.1.3实验试剂及药品
3.1.4培养基
3.2 实验方法
3.2.1 种子培养液
3.2.2 摇瓶发酵
3.2.3 5L自动发酵罐发酵
3.2.4 生物量、残油、槐糖脂和DO值测定
3.2.5 葡萄糖含量测定
3.2.6 摄氧率测定
3.2.7 荧光定量PCR检测
3.2.8 基因相对表达量计算
3.3结果与分析
3.3.1摇瓶发酵中VHb对溶氧和槐糖脂产量的影响
3.3.2VHb对5L发酵罐槐糖脂发酵生产的影响
3.3.3VHb异源表达影响槐糖脂发酵生产的机理研究
3.4本章小结
第四章 氧气对重组菌发酵生产的影响
4.1实验材料
4.1.1实验菌种
4.1.2实验仪器
4.1.3实验试剂及药品
4.1.4培养基及实验所需试剂的配制
4.1.5 培养条件
4.2 实验方法
4.2.1 菌株的活化
4.2.2菌株的保存
4.2.3种子液的培养
4.2.4不同条件发酵生产槐糖脂
4.2.5分析方法
4.3结果与分析
4.3.1葡萄糖标准曲线的绘制
4.3.2不同转速条件下的溶氧变化及其对槐糖脂发酵生产的影响
4.3.3不同通气量条件下的溶氧变化及其对槐糖脂发酵生产的影响
4.3.4不同罐压条件下的溶氧的变化及其对槐糖脂发酵生产的影响
4.4本章小结
结论
参考文献
致谢
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