哈氏噬纤维菌强启动子的克隆及其功能区域和结构特性的研究

声明

摘要

缩写词表

第一章 前言

1．1 启动子的结构和功能

1．1．1 原核生物启动子DNA元件的结构特性

1．1．2 真核生物启动子DNA元件的结构特性

1．2 增强子的结构和特点

1．3 启动子的分类

1．4 启动子的研究方法之探针质粒载体的应用

1．5 国内外启动子的研究状况

1．6 拟杆菌门微生物启动子的研究进展

1．7 论文选题来源和工作思路

第二章 C．hutchinsonii ATCC33406强启动子的筛选及保守区结构的确立

2．1 材料与方法

2．1．1 菌种

2．1．2 质粒与引物

2．1．3 培养基以及抗生素溶液的配制方法

2．1．4 实验试剂及实验器材

2．2 实验方法

2．2．1 哈氏噬纤维菌基因转录水平的分析

2．2．2 启动子DNA片段和lacZ报告基因的获取

2．2．3 启动子片段和lacZ的融合PCR

2．2．4 pSKO8TG和表达片段的双酶切

2．2．5 表达片段和载体的连接反应

2．2．7 大肠杆菌DH5α的热击转化

2．2．8 大肠杆菌阳性转化子的验证

2．2．9 大肠杆菌阳性转化子的保藏

2．2．10 表达载体的酶切验证及测序验证

2．2．11 哈氏噬纤维菌感受态细胞的制各法(甘油MgCl2法)

2．2．12 哈氏噬纤维菌的电击转化

2．2．13 哈氏噬纤维菌阳性转化子的验证

2．2．14 哈氏噬纤维菌阳性转化子的保藏

2．2．15 哈氏噬纤维菌的LacZ酶活测定

2．2．16 哈氏噬纤维菌启动子核心区域的确定

2．2．17 哈氏噬纤维菌启动子的5’RACE技术

2．2．18 哈氏噬纤维菌启动子保守区结构的确立

2．3．1 启动子片段和报告基因lacZ的PCR结果

2．3．2 启动子片段和报告基因lacZ的融合PCR结果

2．3．3 大肠杆菌阳性转化子验证结果

2．3．4 lacZ表达载体的酶切验证和测序结果

2．3．5 哈氏噬纤维菌阳性转化子验证结果

2．3．6 哈氏噬纤维菌强启动子Pchu_fanA的保守结构及截短研究结果

2．3．7 哈氏噬纤维菌强启动子Pchu_fanB的保守结构及截短研究结果

2．3．8 哈氏噬纤维菌强启动子Pchu_fanC的保守结构及截短研究结果

2．3．9 哈氏噬纤维菌强启动子Pchu_fanD的保守结构及截短研究结果

2．3．10 哈氏噬纤维菌强启动子Pchu_fanE的保守结构及截短研究结果

2．3．11 哈氏噬纤维菌强启动子保守区结构的确立

2．4 分析讨论

第三章 C．hutchinsonii ATCC33406启动子的SLIM突变及生物信息学分析

3．1 材料与方法

3．1．1 菌种

3．1．2 质粒

3．1．3 引物

3．1．4 培养基、缓冲液以及抗生素溶液的配制方法

3．1．5 实验试剂及实验器材

3．2 实验方法

3．2．1 用SLIM技术对强启动子Pchu_fanA两保守区的突变

3．2．2 用SLIM技术对强启动子Pchu_fanA两保守区spacer length的突变

3．2．3 用SLIM技术对弱启动子Pchu_fanF和Pchu_fanG的改造

3．2．5 对啥氏噬纤维菌及其它菌株基因组启动子的生物信息学分析

3．3 实验结果

3．3．2 用SLIM技术对Pchu_fanA强启动子第二保守区的突变

3．3．3 用SLIM技术对Pchu_fanA强启动子两保守区spacer length的突变

3．3．4 用SLIM技术对弱启动子Pchu_fanF和Pchu_fanG的改造

3．3．5 用SLIM技术对强启动子Pchu_fanA其它位点的突变

3．3．6 用生物信息学对不同菌株基因组启动子的检索结果

3．4 分析讨论

全文总结与展望

参考文献

致谢