文摘
英文文摘
论文说明：符号说明
原创性声明及关于学位论文使用授权的声明
第一章活细胞内生物单分子的荧光成像
1.1引言
1.2荧光成像技术
1.2.1全内反射荧光显微术
1.2.2共聚焦荧光显微术
1.2.3近场扫描光学显微术
1.2.4多光子激发荧光显微术
1.3荧光光谱技术
1.3.1荧光共振能量转移
1.3.2荧光寿命成像显微术
1.3.3荧光相关光谱
1.4荧光探针及标记方法
1.4.1荧光探针
1.4.2荧光探针的标记
1.5展望
1.6参考文献
第二章全内反射荧光显微术结合细胞内落射荧光显微术观测活细胞内单个量子点标记的生物大分子
2.1引言
2.2材料和方法
2.2.1试剂
2.2.2细胞培养及处理
2.2.3物镜型全内反射荧光显微镜
2.2.4活细胞上单个insulin-QDs荧光图像的获取
2.3结果与讨论
2.3.1细胞自发荧光的消除
2.3.2细胞膜受体结合insulin的特异性
2.3.3采用TIRFM对活细胞上表面的单个insulin-QD进行成像
2.3.4细胞内Epi-FM观测胞内和下表面质膜荧光图像
2.4结论
2.5参考文献
第三章单分子水平观测胰岛素作用下质膜上胰岛素受体的聚集
3.1引言
3.2实验部分
3.2.1试剂
3.2.2细胞培养
3.2.3细胞自发荧光的漂白
3.2.4观察细胞上insulin的结合及IR的聚集分布情况
3.2.5观察细胞上anti-IR的结合及IR的聚集分布情况
3.2.6特异性结合实验
3.2.7仪器
3.2.8成像方法及数据分析
3.3结果与讨论
3.3.1 Insulin-biotin的QD-streptavidin荧光标记
3.3.2 Insulin-biotin和QD-streptavidin的结合方式
3.3.3细胞膜IR结合insulin的特异性
3.3.4 IR-insulin复合物的形成
3.3.5细胞膜上单个IR-insulin复合物的荧光观测
3.3.6细胞膜上IR-insulin聚集体的荧光观测
3.3.7单分子水平追踪质膜上IR二聚现象
3.3.8单分子追踪IR-insulin多聚现象
3.3.9连续观测质膜上insulin-QD的结合和IR-insulin复合物的聚集
3.3.10 Insulin在IR信号转导中的诱导作用
3.4结论
3.5参考文献
第四章全内反射结合胞内落射荧光成像法观测活细胞内IR-insulin内涵体
4.1引言
4.2实验部分
4.2.1试剂
4.2.2细胞培养
4.2.3细胞自发荧光的漂白
4.2.4观察质膜上IR-insulin聚集体的内吞
4.2.5观察细胞内IR-insulin内涵体
4.2.6观察不同孵育时间IR-insulin的内在化
4.2.7连续观测胞内IR-insulin内涵体
4.2.8特异性结合实验
4.2.9仪器、成像方法及数据分析
4.3结果与讨论
4.3.1细胞膜IR结合insulin的特异性
4.3.2细胞内IR-insulin内涵体的形成
4.3.3质膜上及胞内IR-insulin的荧光观测
4.3.4早期内涵体和晚期内涵体的荧光观测
4.3.5追踪观察质膜上IR-insulin聚集体的内吞
4.3.6实时观测胞内IR-insulin内涵体
4.4结论
4.5参考文献
致谢
博士期间发表论文：
发表论文一
发表论文二
山东大学;
