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符号说明
第一章文献综述
一、一氧化氮供体最新研究进展及应用前景
1一氧化氮供体药物在各种疾病治疗中的应用
2 NO供体研究的最新进展和趋势
3结语与展望
二、细菌耐药性的生化机制及其对策
1抗生素耐药性的生化机制
2克服抗生素耐药性的方法
3结语
三、一氧化氮与细胞凋亡的关系及研究进展
1 NO对细胞凋亡的双重作用机制
2 NO与细胞凋亡关系的研究进展
3结语
第二章β-半乳糖苷酶依赖的新型一氧化氮杀菌剂β-Gal-NONOate的抗菌作用研究
一、材料
1.1菌种和培养基
1.2试剂
1.3仪器
二、方法
2.1感受态细胞的转化
2.2转化子的鉴定
2.3集落形成单位的测定
2.4测定细菌的生长及β-半乳糖苷酶酶活曲线
2.5 NO供体对细菌存活率影响的测定
2.6测量胞内的NO水平
2.7统计分析
三、结果
3.1 E.coli DH5α(pUC18)菌株的构建
3.2分析细菌的生长曲线和酶活性曲线
3.3 NO供体对细菌存活率的影响
3.4胞内的NO水平分析
四、讨论
五、结语与展望
六、创新点
第三章β-Gal-NONOate消除大肠杆菌Amp耐药性作用的探索
一、材料
1.1菌种和培养基
1.2试剂
1.3仪器
二、方法
2.1 X-gal染色鉴定β-半乳糖苷酶的活性
2.2最低抑菌浓度(MIC)的测定
2.3 Amp抗性菌株的诱导
2.4 NO供体对E.coli K-12 Amp耐药性的影响
2.5抗生素存在的条件下，NO供体对抗性细菌生存能力的影响
2.6测定细菌的生长曲线
2.7数据分析
三、结果
3.1 Amp抗性菌株的获得
3.2 NO供体对消除E.coli K-12 Amp抗性的影响
3.3抗生素存在的情况下NO供体对恢复细菌敏感性的影响
3.4细菌生长曲线分析
四、讨论
五、展望和前景
第四章双向电泳技术比较抗性消除前后细菌蛋白质组的变化
一、材料
1.1菌种和培养基
1.2试剂
1.3仪器
二、方法
2.1菌种活化
2.2蛋白提取
2.3蛋白检测(Bradford法)
2.4 SDS-PAGE电泳检测样品蛋白
2.5第一向等电聚焦电泳(IFE)
2.6第二向SDS-PAGE电泳
三、结果
3.1标准蛋白曲线
3.2 SDS-PAGE电泳检测样品蛋白
3.3 双向电泳图像分析
四、讨论
五、结语与展望
第五章一氧化氮供体抗肿瘤作用新途径的建立—定位肿瘤细胞内释放NO
一、材料
1.1细胞培养
1.2试剂
1.3仪器
二、方法
2.1细胞培养
2.2 X-gal染色鉴定β-半乳糖苷酶的活性
2.3细胞内NO2-/NO3-浓度的测定(作为一种衡量NO水平的方法)
2.4细胞死亡率(cell death rate)分析
2.5细胞毒性(cytotoxicity)分析
2.6统计分析
三、结果
3.1 X-gal染色鉴定β-半乳糖苷酶的活性
3.2胞内的NO水平分析
3.3 β-Gal-NONOate和NONOate对细胞死亡率的影响
3.4经β-Gal-NONOate和NONOate处理的两种细胞存活率的比较
四、讨论
五、结语与展望
六、创新点
第六章新型NO供体β-Gal-NONOate对C6及HeLa细胞的抗肿瘤作用
一、材料
1.1细胞培养
1.2试剂
1.3仪器
二、方法
2.1细胞培养
2.2重组pcDNA3-LacZ质粒的制备
2.3质粒转染与稳定表达β-半乳糖苷酶的阳性细胞克隆的筛选
2.4 X-gal染色检测β-半乳糖苷酶活性
2.5细胞中NO释放量的检测
2.6细胞克隆形成能力的检测
2.7细胞死亡率检测
2.8细胞毒性检测—MTT法
2.9统计分析
三、结果
3.1 pcDNA3-LacZ质粒的验证
3.2阳性细胞克隆的筛选
3.3 β-半乳糖苷酶活性的检测
3.4细胞计数法比较NO供体对C6细胞死亡率的影响
3.5两种NO供体在C6/LacZ、C6细胞胞内的NO释放量
3.6两种NO供体在HeLa/LacZ、HeLa细胞胞内的NO释放量
3.7 HeLa/LacZ、HeLa细胞克隆形成率和细胞死亡率检测
3.8 MTT法比较β-Gal-NONOate和NONOate的抗肿瘤活性
四、讨论
五、展望
第七章β-Gal-NONOate诱导细胞凋亡作用的研究
一、材料
1.1细胞培养
1.2试剂
1.3仪器
二、方法
2.1细胞培养
2.2细胞形态学观察
2.3细胞凋亡的DNA电泳观察
2.4 TUNEL法检测细胞凋亡
2.5检测细胞内[Ca2+]i的变化
2.6检测细胞线粒体跨膜电位的变化
2.7双染法检测凋亡细胞比例
2.8 β-Gal-NONOate与cisplatin联合用药对肿瘤细胞的细胞毒作用
2.9统计学分析
三、结果与分析
3.1细胞形态学观察
3.2细胞凋亡的DNA电泳观察
3.3 TUNEL法检测细胞凋亡
3.4细胞内[Ca2+]i的变化
3.5细胞线粒体跨膜电位的变化
3.6双染法检测凋亡细胞比例
3.7 β-Gal-NONOate与cisplatin联合用药对肿瘤细胞的抑制作用
四、讨论
五、意义
参考文献
致谢
在读期间发表文章及获奖情况
附：两篇已发表的英文SCI论文
发表论文一
发表论文二
