新型双启动子DNA疫苗载体的研制及在人乳头瘤病毒疫苗研究中的应用

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研制一种新型的双启动子DNA疫苗的载体pCMVnir,其携带HCMV前早期启动子CMVie和细菌硝酸盐还原酶基因启动子nirB,可在原核细胞和真核细胞中表达抗原基因;并以此载体,构建HPV16双启动子DNA疫苗载体pCMVnir16L1E7,导入减毒沙门氏细菌S.SL3261,可有效表达HPV16 L1E7抗原,口服免疫后可在小鼠体内相关淋巴组织和器官中定植并有限复制达6周,然后被机体清除;分别用pQE-16L1E7在大肠杆菌和rAd5-16L1E7在293细胞中表达的L1E7蛋白和嵌和VLP研究疫苗的效果,疫苗接种后可诱发HPV特异的粘膜免疫,在生殖道分泌物中产生HPV特异的抗体,能中和HPV16 VLP诱导的RBC凝集作用,pCMVnir16L1E7诱导的免疫反应强度要优于对照疫苗组的HPV16疫苗载体pNir-16L1E7、pNir-16L1E7CTA2B和常规DNA疫苗pCMV-16L1E7.与其他疫苗体系相比具有明显的优点,沙门氏细菌可将疫苗直接导入APC细胞中表达,且做为一种天然的免疫佐剂,可促进抗原的递呈;因为其携带原核和真核两种启动子、细菌复制子,可通过增加抗原量、增加机体和细胞内DNA疫苗拷贝数等途经增强DNA疫苗的疗效,同时还可以作为一般的载体用于蛋白质在真核和原核细胞的表达,简单易行,不用添加化学诱导剂和改变培养体系的温度.据文献检索:此类质粒尚属首次报到.新型双启动子DNA疫苗载体pCMVnir(pCN)的构建及启动子活性分析.HPV16新型双启动子DNA疫苗载体pCMVnir16L1E7及其他相关载体的构建及表达.以减毒沙门氏菌为载体的S.SL3261/pCMVnir16L1E7 DNA疫苗在小鼠体内代谢过程.HPV16 VLP和抗原的制备.HPV16双启动子DNA疫苗pCMVnir16L1E7及其他疫苗诱导的粘膜免疫反应的初步研究.

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作者
卞继峰;
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作者单位

山东大学;

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授予单位山东大学;
学科病原生物学
授予学位博士
导师姓名于修平;
年度 2003
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原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类免疫学技术、设备及实验方法;人体病毒学（致病病毒）;
关键词
乳头瘤病毒; DNA疫苗; 粘膜免疫; 沙门氏细菌; 载体; 启动子;

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