声明
符号说明
1 前言
1.1 概述
1.2 腺胃炎流行病学
1.2.1 发生和分布
1.2.2 流行特点
1.3 腺胃炎病理变化
1.3.1 临床症状
1.3.2 剖检病变
1.3.3 组织学病变
1.4 腺胃炎致病因素研究进展
1.4.1 非传染性因素
1.4.2 传染性因素
1.4.3 多因素协同
1.5 高通量测序在未知病毒鉴定上的应用
1.5.1 高通量测序技术的发展
1.5.2 二代测序平台
1.5.3 三代测序平台
1.5.4 高通量测序鉴定未知病毒
1.6 GyV3病原学特征
1.6.1 圆圈病毒属概述
1.6.2 Gyrovirus 3（GyV3）研究概述
1.7免疫共沉淀联合质谱分析技术鉴定互作蛋白
1.7.1信号转导和转录激活子（Signal transducers and activators of transcription，STAT）
1.7.2酪蛋白激酶（casein kinase，CK）
1.7.3胱天蛋白酶募集域蛋白9（CasPase recruitment domain family member 9，CARD9）
1.7.4 T细胞受体（T Cell Receptor，TCR）
1.8研究目的及意义
2 实验材料及方法
2.1 实验材料
2.1.1 实验动物，鸡胚
2.1.2 引物合成
2.1.3 主要试剂和试剂盒
2.1.4 主要缓冲液及试剂配制
2.1.5 主要仪器设备
2.1.6 分子生物学分析软件
2.2 实验方法
2.2.1 流行病学调查
2.2.2 未知病毒单感染病例筛选
2.2.3 未知病毒单感染病例复制动物疾病模型
2.2.4 未知病毒鉴定
2.2.5 GyV3回顾性流行病学调查
2.2.6 GyV3培养
2.2.7 GyV3致病特征
2.2.8 GyV3在鸡体内各器官的分布
2.2.9初步筛选GyV3衣壳蛋白VP1相互作用蛋白
3 结果与分析
3.1 流行病学调查结果
3.1.1 大体剖检病变类型
3.1.2 病理组织学病变类型
3.1.3 病原检测结果
3.2 筛选未知病毒单感染病例
3.2.1 已知腺胃炎相关病毒PCR检测
3.2.2 临床、大体及剖检病变
3.3 未知病毒单感染TVP动物疾病模型
3.3.1 回归动物临床、大体及剖检病变
3.3.2 回归动物病理组织学变化进程
3.3.3 PCR检测排除已知TVP相关病毒感染
3.4 未知病毒鉴定结果
3.4.1 电子显微镜观察病毒形态
3.4.2 病毒宏基因组测序数据分析结果
3.4.3 GyV3全长序列扩增结果
3.4.4 GyV3基因结构预测结果
3.4.5 GyV3同源性比对结果
3.4.6 GyV3基因结构比对结果
3.4.7 GyV3全基因组进化树分析结果
3.5 GyV3回顾性流行病学调查结果
3.6 GyV3在原代鸡胚腺胃细胞上纯培养
3.7 GyV3致病特征
3.7.1 纯培养GyV3回归动物致病特征
3.7.2 GyV3不同接种方式对SPF鸡致病性结果
3.7.3 GyV3对不同日龄SPF鸡致病性结果
3.8 GyV3在鸡体内各器官的分布
3.8.1 绝对荧光标准曲线构建结果
3.8.2 荧光定量PCR检测各器官病毒载量结果
3.9Co-IP筛选GyV3衣壳蛋白VP1相互作用蛋白
3.9.1flag-VP1基因扩增结果
3.9.2T-flag-VP1载体和pcDNA3.1(+)载体双酶切结果
3.9.3pcDNA3.1(+)-flag-VP1重组载体测序结果
3.9.4pcDNA3.1(+)-flag-VP1重组载体测序结果
3.9.5免疫共沉淀后上清SDS-PAGE结果
3.9.6质谱分析结果
4. 讨论
4.1流行病学调查和单感染TVP疾病模型建立
4.2 PacBio三代宏病毒测序鉴定未知病毒
4.3 GyV3发病规律及致病机理
4.4 GyV3 衣壳蛋白VP1 互作蛋白筛选
5. 结论
参考文献
致谢
附录
1. GyV3-SDAU-1 株全基因组序列
2.pcDNA3.1(+)-flag-VP1 重组载体序列
个人简历
