枯草芽孢杆菌表达产气荚膜梭菌α,β和ε毒素融合蛋白对小鼠的免疫保护作用

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论文说明

符 号 说 明

1前言

1.1 产气荚膜梭菌简介

1.1.1 产气荚膜梭菌生物学特征

1.1.2 产气荚膜梭菌致病机理

1.1.3 产气荚膜梭菌毒素研究进展

1.1.4 产气荚膜梭菌分型及相关疾病

1.2 产气荚膜梭菌重组疫苗

1.2.1 重组融合毒素蛋白

1.2.2 重组疫苗载体

1.3 枯草芽孢杆菌表达系统概述

1.3.1 枯草芽孢杆菌概述

1.3.2 表达质粒

1.3.3 宿主菌株

1.3.4 枯草芽孢杆菌转化

1.4 研究目的及意义

2 材料和方法

2.1 材料

2.1.1 菌株及质粒

2.1.2 实验动物

2.1.3 试剂

2.1.4 仪器

2.1.5 主要溶液及培养基

2.2 β毒素蛋白抗原表位预测及免疫原性分析

2.2.1 β毒素蛋白抗原表位预测

2.2.2 Cpb108-305毒素重组表达载体构建

2.2.3 Cpb108-305毒素蛋白及Cpb蛋白诱导表达

2.2.4 Cpb108-305毒素蛋白与Cpb蛋白免疫效果比较

2.3 产气荚膜梭菌Cpa-b-x融合蛋白原核表达质粒的构建及表达

2.3.1 pHT43-Cpa-b-x质粒构建

2.3.2 重组产气荚膜梭菌Cpa-b-x基因PCR扩增

2.3.3 重组产气荚膜梭菌Cpa-b-x基因克隆及测序

2.3.4 pHT43-Cpa-b-x重组表达载体的构建

2.3.5 枯草芽孢杆菌阳性转化子的筛选

2.3.6 Cpa-b-x融合蛋白的表达、鉴定及纯化

2.4 口服表达融合蛋白的枯草芽孢杆菌对小鼠的免疫保护

2.4.1 口服免疫

2.4.2 血清抗体lgG及肠道黏膜抗体slgA检测

2.4.3 细胞因子分泌水平检测

2.4.4 外周血淋巴细胞转化率检测

2.4.5 外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞含量检测

2.4.6 攻毒保护及病理组织观察

2.4.7 数据分析

3 结果与分析

3.1 β毒素蛋白抗原表位预测结果及免疫原性分析

3.1.1 β毒素蛋白抗原表位预测结果

3.1.2 β毒素蛋白表达鉴定结果

3.1.3 免疫效果比较

3.2 Cpa-b-x融合蛋白原核表达质粒的构建及表达结果

3.2.1 枯草芽孢杆菌pHT43-Cpa-b-x阳性转化子的构建

3.2.2 Cpa-b-x融合蛋白的表达及鉴定

3.3 口服表达融合蛋白的枯草芽孢杆菌对小鼠的免疫保护结果

3.3.1 血清抗体lgG及肠道黏膜抗体slgA结果分析

3.3.2 细胞因子分泌水平结果分析

3.3.3 外周血淋巴细胞转化率分析结果

3.3.4 外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞含量结果分析

3.3.5 攻毒后免疫保护率

3.3.6 小鼠肠道病理组织切片结果分析

4 讨论

5 结论

参考文献

致谢

攻读硕士期间发表论文

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