α-法尼烯合酶过表达对转基因烟草生长发育的影响及其基因启动子的克隆与功能分析

摘要

1 前言

1．1 植物萜类物质的重要作用

1．2 植物萜类物质的合成途径

1．2．1 IPP和DMAPP的形成

1．2．2 形成异戊烯基焦磷酸前体

1．2．3 形成萜类物质

1．3 植物萜烯合酶研究进展

1．4 萜类代谢工程对植物生物学特性的影响

1．5 α-法尼烯及α-法尼烯合酶研究进展

1．6 启动子概述

1．6．1 启动子的种类

1．6．2 启动子分离的方法

1．7 启动子的研究方法

1．7．1 生物信息学方法

1．7．2 实验方法功能分析

1．8 本研究的目的意义

2 材料与方法

2．1 实验材料

2．1．1 植物材料

2．1．2 菌株与质粒

2．1．3 酶及生化试剂

2．1．4 PCR引物

2．2 实验方法

2．2．1 过表达α-AFS转基因烟草植株生长特性分析

2．2．3 总RNA提取

2．2．4 cDNA第一链的合成

2．2．5 实时荧光定量PCR(qPCR)

2．2．6 激素处理

2．2．7 转基因烟草萜类物质与类固醇的测定

2．2．8 转基因烟草生物碱含量的测定

2．2．9 转基因烟草光合色素含量的测定

2．2．10 转基因植株抗逆生理指标测定

2．2．11 苹果α-AFS基因多态性分析

2．2．12 苹果α-法尼烯合酶基因启动子分离

2．2．13 转基因烟草植株检测

3 结果与分析

3．1 转α-AFS基因烟草生长发育特性及分子基础

3．1．1 转基因植株和野生型植株的表型分析

3．1．2 α-AFS基因在烟草中过表达对激素含量影响

3．1．3 α-AFS基因在烟草中过表达对细胞色素与生物碱含量影响

3．1．4 α-AFS基因在烟草中过表达对NtHMGR2、NtFPS和NtDXS、NtDXR表达的影响

3．1．5 叶片中GAs合成代谢相关基因表达分析

3．1．6 开花分子标记基因表达分析

3．1．7 GA3和PCB处理对GAs代谢基因表达的影响

3．1．8 转基因烟草挥发物检测

3．1．9 转基因烟草总固醇含量检测

3．1．10 转基因烟草植株抗氧化能力检测

3．1．11 转基因烟草植株抗氯化钠胁迫检测

3．1．12 高温处理对转基因烟草光合、荧光参数和相对电导率的影响

3．2 α-法尼烯合酶基因启动子克隆及功能分析

3．2．1 α-法尼烯合酶基因多态性分析

3．2．2 α-AFS基因启动子的分离及其特征分析

4 讨论

5 结论

参考文献

致谢