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可溶性MICA-NKG2D结合上调活化性CD3-CD56+NK细胞产生IFN-γ对cGVHD的潜在影响

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1 材料与方法

1.1 一般资料

1.2 实验方法

1.3 统计学处理

2 结 果

2.1 NK细胞的纯化、培养结果

2.2 sMICA对NK细胞表面受体NKG2D表达水平的影响

2.3 sMICA对NK细胞分泌IFN-γ水平的影响

2.4 sMICA对NK细胞杀伤K562细胞株的影响

2.5 异基因造血干细胞移植患者血清中sMICA水平

3 讨 论

3.1 sMICA的产生

3.2 sMICA对NK细胞表面NKG2D受体表达的影响

3.3 sMICA对NK细胞杀伤功能的影响

3.4 sMICA对NK细胞分泌IFN-γ的影响

3.5 sMICA、IFN-γ与cGVHD

4 结 论

参考文献

综述：NK细胞的活化信号轴NKG2D/NKG2DL

致谢

在学期间承担/参与的科研课题与研究成果

个人简历

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摘要

目的：
　　本实验探讨sMICA通过影响移植物中NK细胞表面NKG2D表达量、IFN-γ分泌水平影响异基因造血干细胞移植后cGVHD的发生。
　　方法：
　　1. NK细胞的纯化：采集健康志愿者外周血20ml，Rosettesep NK富集试剂盒分选NK细胞，采用检测分选前后细胞纯度变化。
　　2. NKG2D表达水平和IFN-γ分泌水平检测：分选后NK细胞进行体外培养，观察培养前后细胞数量的变化。采用流式细胞术检测NK细胞与不同浓度sMICA蛋白共培养后NKG2D的表达水平。ELISA检测培养液中IFN-γ的含量。
　　3. NK细胞杀伤功能检测：采用CCK8比色法，K562细胞为靶细胞，效靶比为10：1，与不同浓度sMICA蛋白共培养的NK细胞对K562细胞的杀伤作用。
　　4.采集异基因造血干细胞移植患者移植后第100天外周血，采用ELISA检测血清中sMICA的含量。
　　结果：
　　1. NK细胞的纯度：分选前后分别为（13.2±2.1）％和（88.6±5.5）%。
　　2. NK细胞表面NKG2D的表达率：sMICA0、100 ng/ml NKG2D的表达率分别为（91.24±1.96）%、（80.11±2.21）%，差异有统计学意义（P<0.05）。
　　3.各组培养液中IFN-γ的分泌水平：sMICA0、0.5 ng/ml、1 ng/ml、10 ng/ml、100 ng/ml浓度组IFN-γ的分泌水平分别为（134.74±23.30）pg/ml、（190.43±15.41）pg/ml、（215.91±14.54）pg/ml、（128.35±18.75）pg/ml、（95.09±15.67）pg/ml，sMICA0.5 ng/ml、1 ng/ml浓度组上调NK细胞分泌IFN-γ水平，明显高于sMICA0浓度组，差异有统计学意义（P<0.05）。SMICA10 ng/ml、100 ng/ml浓度组下调NK细胞分泌IFN-γ水平，低于sMICA0浓度组，差异有统计学意义（P<0.05）。
　　4. NK细胞的杀伤活性：SMICA0、100 ng/ml浓度组NK细胞的杀伤活性分别为（38.82±2.21）%、（12.71±1.48）%。SMICA100 ng/ml浓度组明显低于sMICA0浓度组，差异有统计学意义（P<0.05）。
　　5. ELISA检测12例患者血清中sMICA的含量：6号患者sMICA的含量为386.08 pg/ml，明显高于其他患者，6号患者是唯一有cGVHD的患者。
　　结论：
　　SMICA可以下调NK细胞表面NKG2D受体的表达，降低NK细胞的杀伤活性；对IFN-γ分泌水平的调节具有剂量依赖性，低剂量的sMICA（0.5 ng/ml和1 ng/ml）上调活化的NK细胞分泌IFN-γ水平，而高剂量的sMICA（10 ng/ml和100 ng/ml）降低活化的NK细胞分泌IFN-γ水平。外周血sMICA水平可作为cGVHD发生潜在的预测指标，成为潜在减弱cGVHD的免疫治疗的新靶点。

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